của vi khuẩn S. aureus
3.4.3.1. Phương pháp xác ựịnh số lượng vi khuẩn S. aureus
Các bước tiến hành
ỜBước 1: Tiến hành tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn
hiếu khắ nhưng chỉ tiến hành pha loãng ựến nồng ựộ 10Ờ2.
Ờ Bước 2: Hút 0,1 ml dung dịch ựã pha loãng ở nồng ựộ 10Ờ1, 10Ờ2 vào ựĩa thạch chapman ựã chuẩn bị trước, sau ựó làm tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn hiếu khắ. Sau khi cấy láng, ựể trong tủ ấm ựủ thời gian quy ựịnh, ựếm những khuẩn lạc S. aureus ựiển hình tròn, hơi ựục, dạng S, làm môi trường chuyển màu vàng trên các ựĩa chứa ắt hơn 150 khuẩn lạc S. aureus ựiển hình và ắt hơn 300 khuẩn lạc tổng số (khuẩn lạc ựiển hình và không ựiển hình).
Ờ Bước 3: Tắnh kết quả: Tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn hiếu khắ.
Hình 3.1. Sơ ựồ tóm tắt quá trình phân lập, giám ựịnh S. aureus từ các mẫu thịt
Lên men ựường
Kiểm tra hình thái Thử phản ứng sinh hóa
Thạch thường (dạng S, màu vàng)
Tắnh chất sinh học Giữ trên thạch thường Khuẩn lạc thuần khiết
Sapman (ựổi màu môi trường thành màu vàng) Thịt (bò, gà, lợn)
Lacto Gluco Manto Galacto
Cầu khuẩn dắnh lại với nhau như chum nho, Gram
(+) +/- +/- +/- -
Phản ứng Catalaz
3.4.3.2. Phương pháp giám ựịnh ựặc tắnh sinh học của S. aureus
Bảng 3.1: Một số ựặc tắnh sinh hóa ựặc trưng của vi khuẩn S. aureus
Vi khuẩn Catalase Galactose
S. aureus + Ờ
Trên môi trường thạch Chapman, chọn ra các khuẩn lạc ựiển hình, nuôi cấy trong môi trường nước thịt ựể tiến hành kiểm tra một số ựặc tắnh sinh hóa.
* Phản ứng lên men ựường
Ờ Chuẩn bị môi trường BHI: pha theo công thức có sẵn.
Ờ Chỉ thị màu bromothymol blue: pha theo tỷ lệ Cồn 90o: 100 ml
Bromothymol blue: 1,5g
Ờ Lấy 100 ml BHI, cho vào 0,6 ml chỉ thị bromothymol blue, lắc ựều, phân vào các ống nghiệm ở ựáy ựã có 1 ống Durham. Hấp ướt ở 120oC trong 30 phút. Môi trường có màu xanh lơ.
Ờ Pha các loại ựường: Glucose, lactose, galactose, mantose thành dung dịch 10%, hấp cách quãng trong 30 phút mỗi ngày, hấp trong 3 ngày liền.
Ờ Mỗi ống môi trường cho 1 loại ựường theo tỷ lệ 0,30 ml dung dịch ựường 10% trong 4 ml môi trường.
Ờ Cấy giống S. aureus cần kiểm tra vào ống BHI có chứa ựường rồi ựể trong tủ ấm 37oC trong 24 giờ, lấy ra xem kết quả.
Ờ đánh giá kết quả: Cùng một lúc kiểm tra ựược 2 tắnh chất của E. coli
+ Phản ứng lên men ựường
Phản ứng dương tắnh: môi trường chuyển sang màu vàng. Phản ứng âm tắnh: môi trường không chuyển màu.
+ Phản ứng sinh hơi
Phản ứng dương tắnh: Ống Durham bị ựẩy lên, trong ống có một khoảng khắ. Phản ứng âm tắnh: Ống Durham vẫn ở ựáy ống nghiệm, trong ống không có gì. * Phản ứng Catalase
Ờ Nhỏ một giọt nước sinh lý lên phiến kắnh sạch ựã chuẩn bị từ trước, dùng que cấy lấy một khuẩn lạc ựiển hình trên môi trường Chapman trộn ựều với nước sinh lý, sau ựó nhỏ thêm một giọt H2O2 3%.
Ờ Phản ứng dương tắnh: có hiện tượng sủi bọt. Ờ Phản ứng âm tắnh: không có hiện tượng sủi bọt.
3.4.4. Phương pháp xác ựịnh số lượng và giám ựịnh một số ựặc tắnh sinh học của vi khuẩn E. coli của vi khuẩn E. coli
3.4.4.1. Phương pháp xác ựịnh số lượng vi khuẩn E. coli
Các bước tiến hành
ỜBước 1: Tiến hành tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn
hiếu khắ nhưng chỉ tiến hành pha loãng ựến nồng ựộ 10Ờ2.
ỜBước 2: Hút 0,1 ml dung dịch ựã pha loãng ở nồng ựộ 10Ờ1, 10Ờ2 vào ựĩa thạch EMB ựã chuẩn bị trước, sau ựó làm tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn hiếu khắ. Sau khi cấy láng, ựể trong tủ ấm ựủ thời gian quy ựịnh, ựếm những khuẩn lạc E. coli ựiển hình màu tắm ựen có ánh kim loại màu xanh lá cây trên các ựĩa chứa ắt hơn 150 khuẩn lạc E. coli ựiển hình và ắt hơn 300 khuẩn lạc tổng số (khuẩn lạc ựiển hình và không ựiển hình).
Ờ Bước 3: Tắnh kết quả: Tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi
Hình 3.2. Sơ ựồ tóm tắt quá trình phân lập, giám ựịnh E. coli
IMViC Sinh H2S Lên men
ựường
Kiểm tra hình thái Thử phản ứng sinh hóa
EMB (Dạng S, có ánh kim)
Tắnh chất sinh học Giữ trên thạch máu Khuẩn lạc thuần khiết
MAC (Hồng cánh sen) Thịt (bò, gà, lợn)
Indol MR VP Citrate Lacto Glu Mant Galac
o Sorbitol Trực khuẩn ngắn 2 ựầu tròn, Gram (-) + + - - - + + +/- +/- + (- O157:H7)
3.4.4.2. Phương pháp giám ựịnh ựặc tắnh sinh hóa vi khuẩn E. coli
Bảng 3.2: Một số ựặc tắnh sinh hóa ựặc trưng của vi khuẩn E. coli
Vi khuẩn Indol MR VP Citrat H2S Lactose
E. coli + + Ờ Ờ Ờ +
Trên môi trường thạch EMB, chọn ra các khuẩn lạc E. coli ựiển hình cấy vào môi trường nước thịt ựể kiểm tra các ựặc tắnh sinh hóa.
* Phản ứng lên men ựường
Các bước tiến hành tương tự như quá trình thử khả năng lên men ựường của vi khuẩn S. aureus và cũng thử với 4 loại ựường glucose, lactose, mantose, galactose.
* Sinh Indol
Ờ Cấy vi khuẩn nghi ngờ vào môi trường nước peptone, nuôi ở 37oC từ 18 giờ ựến 24 giờ. Nhỏ 0,2 ml ựến 0,3 ml thuốc thử Kovacs vào môi trường ựã nuôi cấy vi khuẩn.
Ờ Phản ứng dương tắnh: trên bề mặt môi trường có vòng màu ựỏ. Ờ Phản ứng âm tắnh: trên bề mặt môi trường không xuất hiện vòng ựỏ. * VP
Ờ Cấy vi khuẩn nghi ngờ vào môi trường pepton glucose, nuôi ở 37oC. Sau 24 giờ nhỏ vào môi trường nuôi cấy trên 5 giọt thuốc thử VP, ựọc kết quả sau 5 phút ựến 120 phút.
Ờ Phản ứng dương tắnh: môi trường xuất hiện màu ựỏ hồng. Ờ Phản ứng âm tắnh: môi trường không biến màu hoặc màu vàng. * MR
Ờ Cấy vi khuẩn vào môi trường pepton glucose, nuôi ở 37oC, sau 24 giờ nhỏ vào môi trường nuôi cấy trên 5 giọt dung dịch ựỏ methyl trong cồn 95o, ựọc kết quả sau 5 phút.
Ờ Phản ứng dương tắnh: môi trường màu ựỏ Ờ Phản ứng âm tắnh: môi trường màu vàng.
Ờ Phản ứng nghi ngờ: môi trường có màu giữa ựỏ và vàng. * Citrat
Ờ Phản ứng kiểm tra sự sử dụng Citrat của vi khuẩn.
Ờ Cấy vi khuẩn vào thạch Simon Citrat nuôi ở 37oC từ 18 giờ ựến 24 giờ. Ờ Phản ứng dương tắnh: môi trường chuyển từ màu xanh lá cây sang màu xanh nước biển.
Ờ Phản ứng âm tắnh: môi trường giữ nguyên màu xanh lá cây.
* Sinh H2S
Ờ Cấy vi khuẩn vào môi trường TSI, ựể tủ ấm 37oC, sau 24h lấy ra ựọc kết quả.
Ờ Phản ứng dương tắnh: phần thạch ựứng xuất hiện màu ựen. Ờ Phản ứng âm tắnh: phần thạch ựứng không xuất hiện màu ựen.
3.4.5. Phương pháp xác ựịnh số lượng và giám ựịnh một số ựặc tắnh sinh học của vi khuẩn Salmonella của vi khuẩn Salmonella
3.4.5.1 Phương pháp xác ựịnh số lượng vi khuẩn Salmonella
ỜBước 1: Tiến hành tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn
hiếu khắ nhưng chỉ tiến hành pha loãng ựến nồng ựộ 10Ờ2.
ỜBước 2: Hút 0,1 ml dung dịch ựã pha loãng ở nồng ựộ 10Ờ1, 10Ờ2 vào ựĩa thạch SS ựã chuẩn bị trước, làm tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi khuẩn hiếu khắ. Cấy láng xong, ựể trong tủ ấm ựủ thời gian quy ựịnh, ựếm những khuẩn lạc Salmonella ựiển hình không màu có nhân ựen trên các ựĩa chứa ắt hơn 150 khuẩn lạc Salmonella ựiển hình và ắt hơn 300 khuẩn lạc tổng số (khuẩn lạc ựiển hình và không ựiển hình).
Ờ Bước 3: Tắnh kết quả: Tương tự như phương pháp xác ựịnh tổng số vi
Hình 3.3. Sơ ựồ tóm tắt quy trình phân lập, giám ựịnh vi khuẩn Salmonella
IMViC Sinh H2S Lên men
ựường
Kiểm tra hình thái Thử phản ứng sinh hóa
XLD (Tròn,ựỏ có nhân ựen)
Tắnh chất sinh học Giữ trên thạch máu Khuẩn lạc thuần khiết
SS (Tròn, có nhân ựen) Thịt (bò, gà, lợn)
Indol MR VP Citrate Lacto Gluco Manto Galacto
Trực khuẩn ngắn 2 ựầu tròn,
3.4.5.2. Phương pháp giám ựịnh ựặc tắnh sinh hóa của vi khuẩn Salmonella
Bảng 3.3: Một số ựặc tắnh sinh hóa ựặc trưng của vi khuẩn Salmonella
Vi khuẩn Indol MR VP Citrat H2S Lactose
Salmonella Ờ + Ờ + + Ờ
Từ môi trường SS, chọn ra các khuẩn lạc Salmonella ựiển hình cấy vào môi trường nước thịt ựể kiểm tra một số ựặc tắnh sinh hóa.
* Phản ứng lên men ựường
Vi khuẩn Salmonella thử với 4 loại ựường: Glucose, lactose, galactose, mantose và các bước tiến hành làm tương tự như phản ứng thử lên men ựường của E. coli.
* Các phản ứng sinh Indol, VP, MR, Citrat, sinh H2S thử tương tự như quá trình giám ựịnh ựặc tắnh sinh hóa của E. coli.