Ờ Chọn mẫu, phân lập, xác ựịnh vi khuẩn theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên từ các cửa hàng
Ờ Lấy lúc mẫu mới ựược chuyển tới các nhà hàng, khách sạn, bếp ăn trường học, bếp ăn ựường phố, chưa qua bảo quản, sau ựó ựưa về phòng thắ nghiệm càng sớm càng tốt.
Ờ Dụng cụ lấy mẫu, vật chứa mẫu phải sạch, vô trùng và không ảnh hưởng ựến hệ vi sinh vật của mẫu thịt.
Ờ Dùng panh và dao, kéo vô trùng cắt khối lượng thịt (bò, gà, lợn) từ 30 Ờ 40g cho vào hộp ựựng mẫu vô trùng.
3.4.2. Phương pháp xác ựịnh số loại và tổng số vi khuẩn hiếu khắ có trong thịt bò, thịt gà, thịt lợn
Sử dụng phương pháp ựếm khuẩn lạc (CFU) phát triển trên môi trường thạch ựể xác ựịnh vi khuẩn. đây là phương pháp phổ biến nhất trong nghiên cứu vi sinh vật học. Trên môi trường ựặc mỗi vi sinh vật ựứng riêng rẽ sẽ phát triển thành một khuẩn lạc. đếm số lượng khuẩn lạc có thể tắnh ra số lượng vi sinh vật trong mỗi thể tắch của dung dịch nghiên cứu.
Các bước tiến hành
Ờ Bước 1: Chuẩn bị mẫu thử và pha loãng mẫu: Cân 25g mẫu, tiến hành
cắt nhỏ bằng kéo sạch, vô trùng. Chuyển mẫu vào cối vô trùng, bổ sung 225 ml nước sinh lý, nghiền ựều huyễn dịch ựược ựộ pha loãng ban ựầu là 10Ờ1. Sau ựó, hút 1 ml dung dịch nồng ựộ 10Ờ1 vào hệ thống ống nghiệm có chứa 9 ml nước sinh lý, pha loãng tới nồng ựộ 10-4.
ỜBước 2: Hút 0,1 ml dung dịch ựã pha loãng ở nồng ựộ 10Ờ3, 10Ờ4 vào ựĩa thạch thường (nutrient agar) ựã chuẩn bị trước, sử dụng phương pháp cấy láng
trên thạch. Mỗi nồng ựộ pha loãng cấy 3 ựĩa thạch, chú ý làm lần lượt từ nồng ựộ loãng ựến ựặc. Các ựĩa thạch ựược ựể trong tủ ấm 37oC trong khoảng 24h, sau ựó ựếm số lượng khuẩn lạc mọc trên mặt thạch.
ỜBước 3: Tắnh kết quả.
Chọn những ựĩa có từ 150 ựến 300 khuẩn lạc ở các ựĩa của 2 ựộ pha loãng liên tiếp. Tắnh số khuẩn lạc vi khuẩn hiếu khắ (N) cho 1g thịt, bằng cách tắnh trung bình cộng tổng số khuẩn lạc của các ựĩa trên theo công thức sau:
Σ C: Tổng số khuẩn lạc ựặc trưng ựếm ựược trên các ựĩa ựã chọn. V: Thể tắch chất cấy ựược sử dụng trên mỗi ựĩa.
n1, n2: Số ựĩa ở hai ựộ pha loãng liên tiếp ựã chọn thứ 1, thứ 2. d: Hệ số pha loãng của ựậm ựộ pha loãng ựã chọn thứ 1.
Biểu thị kết quả dưới dạng thập phân, làm tròn số kết quả có ựược, chỉ giữ lại hai số có nghĩa.