Nguyên tắc: Sựđịnh lượng này căn bản dựa trên phản ứng mầu đặc trưng cho bởi đường với sự hiện diện của H2SO4.
Cách tiến hành
Bước 1. Ly trích đường
Nghiền nguyên liệu cần định lượng đường, sau đó cân chính xác 1 – 2 g nguyên liệu đã nghiền nhuyễn chứa khoảng 5 – 50 mg đường cho vào cốc thủy tinh 50 ml, cho thêm 10 ml cồn 90o vào. Đun cốc trên nồi cách thủy cho sôi 3 lần (mỗi lần sôi lấy cốc ra cho nguội bớt rồi đặt trở lại). Khuấy đều bằng que thủy tinh, để
nguội, lọc qua giấy lọc.
Sau đó thêm 10 ml cồn 80o vào cốc chứa cặn, khuấy đều, đun sôi 2 lần trên nồi cách thủy. Để nguội, lọc. Tiếp tục làm như vậy khoảng 2 lần. Sau đó đưa cặn lên giấy lọc và tráng cốc 2 – 3 lần bằng cồn 80o nóng (nước tráng cũng cho cả lên lọc). Dịch lọc cho bay hơi ở nhiệt độ phòng hoặc đun nhẹ trên nồi cách thủy để cồn bay hơi hết.
Pha loãng cặn thu được với nước cất thành 50 ml. Để lắng, dung dịch này
đem đi hiện mầu để xác định hàm lượng đường, có thể pha loãng dung dịch đường tùy theo nồng độđường có trong dung dịch nhiều hay ít.
Bước 2. Thực hiện phản ứng mầu
Hút 1 ml dung dịch đường cần định lượng cho vào ống nghiệm rồi thêm vào 1 ml dung dịch phenol 5%. Sau đó, cho chính xác 5 ml H2SO4 đậm đặc vào ống
nghiệm (không để giây acid vào thành ống). Để 10 phút rồi lắc, giữ trên nồi cách thủy 10 – 20 phút ở 25 – 30oC để hiện mầu.
Bước 3. Xây dựng đường chuẩn.
Lấy 7 bình định mức 100 ml rồi bổ sung như bảng 2.1
Bảng 2.1 Thí nghiệm xây dựng đường chuẩn saccharose
Bình Saccharose 0,1% (ml) Nước cất (ml) 1 1 99 2 2 98 3 3 97 4 4 96 5 5 95 6 6 94 7 7 93
Chuẩn bị 8 ống nghiệm, lần lượt cho vào các ống như bảng 2.2 Bảng 2.2 Thí nghiệm phản ứng mầu của đường saccharose
Ống saccharose Dung dịch Phenol 5% (ml) H2SO4 (ml) Nồng độ saccharose (µg) 1 1 ml bình số 1 1 5 10 2 1 ml bình số 2 1 5 20 3 1 ml bình số 3 1 5 30 4 1 ml bình số 4 1 5 40 5 1 ml bình số 5 1 5 50 6 1 ml bình số 6 1 5 60 7 1 ml bình số 7 1 5 70 8 1 ml nước cất 1 5 0 Mầu bền vững trong vài giờ. Xác định cường độ mầu bằng máy quang phổ so mầu ở bước sóng 490 nm.
Tính kết quả
Vẽđường cong chuẩn: trị số mật độ quang của những ống mẫu phải trừđi trị
Mặt khác, trị số mật độ quang của dung dịch đường cần định lượng cũng phải trừđi trị số mật độ quang của ống thử không, rồi dựa vào đường cong chuẩn để suy ra nồng độ x, từđó tính ra lượng đường trong mẫu.