Nguyên tắc
Chất đạm được vô cơ hoá bằng H2SO4 đậm đặc thành amonsulphat (NH4)2SO4.
Muối này đem cho tác dụng với kiềm mạnh như NaOH sẽ giải phóng NH3:
(NH4)2SO4 + NaOH → 2NH3 + H2O + Na2SO4 Sau đó, lượng NH3được hơi nước lôi cuốn sang một bình tam giác có chứa một lượng thừa H3BO3 mà ởđó H3BO3 tự phân ly:
H3BO3→ HBO2 + H2O
Khi cất đạm, NH3 bay sang sẽ phản ứng với HBO2
BO2- Là một base mạnh, bởi vậy dung dịch của bình hứng chuyển từ mầu tím
đỏ sang mầu xanh lá mạ. Lượng BO2-được tạo thành tương đương với NH3 đẩy ra trong quá trình cất đạm. Xác định BO2- bằng cách chuẩn độ ngược với HCl 0,25N. Giai đoạn chuẩn độ kết thúc khi dung dịch chuyển từ mầu xanh lá mạ sang mầu tím
đỏ.
BO2- + H+→ HBO2
Cách tiến hành Bước 1. Vô cơ hoá mẫu
Tùy theo hàm lượng đạm có trong mẫu mà khối lượng mẫu vô cơ hóa nhiều hay ít, Cân a (g) mẫu đã nghiền kỹ cho vào ống phá mẫu, bổ sung 1 g chất xúc tác
H2SO4đđ
Chất đạm → (NH4)2SO4 Xúc tác
và 5 ml H2SO4 đậm đặc đặt lên bếp tiến hành phá mẫu trong tủ hút, đun đến khi dung dịch có mầu xanh rồi trong suốt, tiếp tục đun thêm 30 phút nữa. Để nguội ở
nhiệt độ phòng. Khi phá mẫu xong, để nguội và bổ sung 50 ml nước cất, trộn đều và
để nguội, lắp vào máy chưng cất.
Bước 2. Chưng cất mẫu
Lắp ống phá mẫu vào máy chưng cất, bổ sung 30ml NaOH 32%. Khởi động quy trình chưng cất, dịch chưng cất chuyển sang bình tam giác có chứa sẵn 20ml dung dịch chỉ thị mầu.
Ngừng chưng cất khi dịch chưng cất ra không còn NH3 (thử bằng giấy quỳ). Chuẩn độ bằng HCl 0,25N. Ngừng chuẩn độ khi xuất hiện mầu phớt đỏ.
Tính kết quả
Thông qua lượng HCl 0,25N ta biết được acid boric kết hợp với NH3 và từ đó biết được lượng NH3 giải phóng ra từ mẫu. 1 ml HCl 0,25N tương ứng với 0,0035g nitơ. %Nitơ tổng = 0,25*0,0035 *100 HCl V a Trong đó: VHCl làthể tích HCl 0,25N dùng để chuẩn độ, ml, và a là trọng lượng mẫu đem xác định, g.
Sau khi có kết quả N tổng, chúng ta có thể tính được hàm lượng protein trực tiếp trong nguyên liệu dựa theo công thức sau:
% Protein thô = % Ntổng x 6,25