CHƯƠNG IỊ VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.3.3. Phương phỏp phõn lập vi sinh vật đối khỏng
Phõn lập và tuyển chọn cỏc chủng vi sinh vật đối khỏng theo Geels và Schippers, 1983.
Lấy 10g đất cho vào cối sứ khử trựng nghiền nhỏ. Sau đú cho vào bỡnh tam giỏc loại 250ml đó chứa sẵn 90ml nước cất vụ trựng. Lắc trong 30 phỳt, để lắng tự nhiờn, lấy phần dịch trong để phõn lập vi khuẩn đối khỏng.
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 36
dựng 0,1ml trải đều trờn bề mặt mụi tường KB hoặc PDA, ủ ở nhiệt độ 280C – 300C trong 24 giờ – 48 giờ cú thể nhỡn thấy rừ khuẩn lạc riờng biệt.
Bước 2: Cỏc khuẩn lạc cú hỡnh dạng, màu sắc khỏc nhau được tỏch riờng, hũa loóng trong cỏc ống eppendorf riờng biệt, dựng 100àl dung dịch trải đều trờn bề mặt đĩa mụi trường KB hoặc PDA (mật độ tế bào trong dung dịch sao cho khi ủ ở nhiệt độ 280C – 300C trong 24 giờ – 48 giờ cú thể nhỡn rừ cỏc khuẩn lạc riờng biệt).
Bước 3: Phun dịch nấm Botryodiplodia theobromae Patgõy bệnh chết khụ cành phủ lờn bề mặt mụi trường, ủ ở nhiệt độ 280C – 300C trong 24 giờ - 72 giờ.
Bước 4: Quan sỏt cỏc đĩa mụi trường, nếu xuất hiện những vựng ức chế, nghĩa là cú vi khuẩn đối khỏng tại điểm đú.
Bước 5: Những tế bào vi khuẩn đối khỏng được làm sạch và giữ trong ống nghiệm để sử dụng cho thớ nghiệm tiếp theọ
2.3.4. Phương phỏp đỏnh giỏ khả năng đối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn đối khỏng với nấm Botryodiplodia theobromae Pat trong điều kiện in vitro