C, 30 0 35 0 45 0 C Sau 168 giờ thử HTKS bằng phương pháp lỗ thạch.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4.2. Ảnh hưởng của nguồn cacbon đến khả năng tổng hợp CKS
* Ảnh hưởng của nguồn cacbon
Để nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn cacbon lên khả năng hình thành CKS, đồng thời xác định được nguồn cacbon thích hợp nhất cho chủng TT1.2 sinh CKS cực đại, chúng tôi tiến hành khảo sát một số nguồn cacbon thông thường được sử dụng để lên men CKS đó là: glucose, lactose, saccarose, tinh
bột, glyxerin. Quá trình lên men được tiến hành trên máy lắc tròn với tốc độ 220 vòng/phút, ở 28 – 300C, sau 168 giờ lên men, xác định HTKS bằng
phương pháp đục lỗ. Kết quả được thể hiện trên Bảng 3.16, Hình 3.16, Hình 3.14.
Bảng 3.14. Ảnh hưởng của nguồn cacbon đến khả năng tổng hợp CKS của chủng TT 1.2
Nguồn cacbon bổ sung (1%)
Hoạt tính kháng sinh (D-d, mm)
M.luteus S.entericatyphi S.flexneri
Glucose 10 0,15 14 0,27 +
Lactose 25 0,18 30 0,12 32 0,16
Saccarose 13 0,2 20 0,22 20 0,44
Tinh bột 12 0,36 14 0,15 15 0,31
Glyxerin 8 0,19 13 0,12 +
Chú thích: D: đường kính vòng vô khuẩn, d: đường kính lỗ thạch
(+): hoạt tính yếu ( 5mm)
Hình 3.16. Kết quả ảnh hưởng của nguồn cacbon đến khả năng tổng hợp CKS của chủng TT1.2 bằng phương pháp đục lỗ thạch
1: Glucose 2: Lactose 3: Sacarose 4: Tinh bột 5: Glyxerin
Kết quả nghiên cứu trên cho thấy, khả năng đồng hóa các nguồn cacbon của chủng XK này có sự khác nhau và có ảnh hưởng trực tiếp tới khả năng sinh tổng hợp CKS. Hoàn toàn dễ nhận thấy rẳng nguồn cacbon thích hợp nhất cho sinh tổng hợp CKS của chủng này là lactose. Đặc biệt, chủng TT1.2 lại có khả năng kháng được cả 3 chủng kiểm định gây bệnh nguy hiểm này trên cùng một nguồn cacbon thích hợp, điều này rất thuận lợi cho việc lên men tạo kháng sinh kháng được đồng loạt các chủng kiểm định mà tiết kiệm được thời gian và chi phí, hóa chất cho lên men phục vụ các nghiên cứu tiếp theo.
Hình 3.17: Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của nguồn cacbon đến khả năng tổng hợp CKS của chủng TT1.2
1.Glucose 2. Lactose 3. Sacarose 4. Tinh bột 5. Glyxerin Theo những nghiên cứu trước đây thì khả năng sinh tổng hợp chất CKS ngoại bào của XK khi sử dụng đa dạng các nguồn cacbon là khác nhau. Kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hoàng Minh Huy (2006) cho thấy nguồn cacbon là glucose và rỉ đường là thích hợp nhất cho chủng Streptomyces dicklowii
sinh CKS [11]. Trong khi đó, nguồn cacbon thích hợp nhất cho sinh tổng hợp CKS của 2 chủng XK Streptomyces cinereoruber và Streptomyces kurssanovii K4 là tinh bột tan và glucose [3] .Theo nghiên cứu của Đào Thị Lương và đtg đã công bố, chủng XK L.30 sinh CKS cực đại trên nguồn cacbon là tinh bột [17].
Như vậy, căn cứ vào kết quả nghiên cứu của chúng tôi và những kết quả đã công bố, chúng tôi nhận thấy quá trình sinh tổng hợp CKS của các chủng xạ khuẩn khác nhau được cảm ứng với nguồn cacbon khác nhau và chủng xạ khuẩn TT1.2 sinh tổng hợp CKS mạnh nhất trên môi trường chứa nguồn cacbon là lactose.
* Ảnh hưởng của nồng độ nguồn cacbon
Sau khi xác định được nguồn cacbon thích hợp nhất cho sinh tổng hợp CKS của chủng TT1.2 là lactose, để tối ưu nồng độ lactose, chúng tôi tiến hành nuôi chủng XK này trong môi trường A4 – H dịch thể có nguồn cacbon là lactose với các nồng độ khác nhau từ 0,5% - 3,5%, cách nhau 0,5%. Hoạt tính kháng sinh được xác định bằng phương pháp lỗ thạch. Kết quả được trình bày ở Bảng 3.15. và Hình 3.18.
Bảng 3.15. Ảnh hưởng của nồng độ lactose đến khả năng tổng hợp CKS của chủng TT1.2
Nồng độ nguồn lactose (%)
Hoạt tính kháng sinh (D-d, mm)
M.luteus S.typhi S.flexneri
0,5 27 0,24 28 0,15 31 0,14 1 29 0,18 29 0,15 29 0,16 1,5 31 0,19 32 0,18 30 0,41 2 30 0,22 31 0,36 31 0,38 2,5 32 0,34 32 0,17 31 0,23 3 33 0,17 35 0,25 34 0,37 3,5 31 0,17 34 0,18 30 0,26
Hình 3.18. Kết quả thử HTKS kháng vi khuẩn kiểm định của chủng TT1.2 ở các nồng độ lactose khác nhau bằng phương pháp đục lỗ thạch.
Kết quả trên cho thấy, chủng TT1.2 kháng được đồng loạt các chủng kiểm định của chúng tôi đều đạt cực đại tại nồng độ lactose 3%, đến ngưỡng 3,5% có xu hướng giảm và thấp nhất ở nồng độ lactose 0,5%, như vậy có thể nói hàm lượng lượng lactose có ảnh hưởng rõ rệt đến khả năng sinh tổng hợp CKS của chủng TT1.2 và ảnh hưởng tích cực đến khả năng tổng hợp sinh CKS, trong dải nồng độ khảo sát của chúng tôi, dễ dàng nhận ra được rằng, nhìn chung hàm lượng lactose bổ sung vào môi trường lên men tỉ lệ thuận với HTKS của chủng xạ khuẩn này. Do đó, chúng tôi lựa chọn lactose nồng độ 3% cho các nghiên cứu tiếp theo.