C, 30 0 35 0 45 0 C Sau 168 giờ thử HTKS bằng phương pháp lỗ thạch.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4.1. Lựa chọn môi trường và thời gian lên men thích hợp
Môi trường lên men đóng vai trò rất quan trọng trong công nghệ sản xuất CKS. Một môi trường lên men tốt phải đảm bảo cho chủng sinh trưởng tốt đồng thời cho hiệu suất kháng sinh cao. Để lựa chọn được môi trường đáp ứng được cả hai điều kiện này, chúng tôi sử dụng 6 loại môi trường lên men cơ sở là Gause 1, Gause 2, ISP4, A – 4, A – 4H và 79. Song song với việc lựa chọn môi trường, chúng tôi đồng thời tiến hành tìm thời gian lên men thích hợp, bắt đầu từ 72 giờ của quá trình lên men, cách 24h chúng tôi lại tiến hành thu dịch lên men và thử hoạt tính 1 lần. Quá trình lên men tiến hành trên máy lắc với tốc độ 220 vòng/phút ở 28 – 300C. Kết quả được thể hiện trên Bảng 3.13. và Hình 3.15.
Bảng 3.13. HTKS của chủng TT1.2 trên các môi trường lên men thuộc các giờ thu dịch khác nhau
VSV KĐ Thời gian G1 G2 ISP A4 A4 – H 79 M.luteus 72 - 18 0,26 15 0,6 24 0,21 30 0,63 - 96 - 19 0,18 20 0,16 25 0,34 25 0,19 - 120 - 23 0,29 26 0,82 30 0,7 24 0,32 - 144 - 18 0,71 20 0,28 24 0,18 26 0,67 23 0,16 168 + 19 0,19 31 0,19 32 0,67 31 0,15 - S.entericatyphi 72 - 26 0,34 21 0,27 29 0,78 30 0,12 - 96 - 28 0,1 29 0,22 29 0,55 30 0,6 - 120 - 24 0,13 26 0,15 30 0,18 33 0,79 - 144 - 27 0,27 26 0,29 29 0,29 31 0,48 - 168 + 25 0,41 39 0,18 38 0.35 38 0,21 - S.flexneri 72 - 30 0,19 20 0,43 38 0,14 34 0,16 - 96 - 34 0,26 24 0,26 42 4,66 30 0,27 - 120 - 28 0,38 30 0,14 40 0,3 40 0,41 - 144 + 30 0,12 34 0,33 30 0,23 40 0,37 - 168 + 30 0,46 32 0,17 30 0,77 42 0,29 -
Chú thích: D: đường kính vòng vô khuẩn, d: đường kính lỗ thạch
Hình 3.15. HTKS của chủng TT1.2 trên các môi trường lên men thu dịch 168 giờ
Các kết quả trên đã chứng tỏ môi trường lên men có ảnh hưởng rất rõ rệt đến khả năng sinh tổng hợp chất kháng sinh của chủng TT1.2, chủng chỉ thể hiện hoạt tính kháng VSV kiểm định trên 4 môi trường nghiên cứu là Gause 1, ISP, A4, A4-H. Trong đó, HTKS trong dịch lên men của môi trường A – 4H là cao nhất 31 mm với VK kiểm định M.luteus, 38 mm với vi khuẩn kiểm định S.typhi và 42 mm với VK kiểm định S.flexneri ). Ngoài ra, 2 môi trường cho HT kháng khuẩn khá cao là A4 có HT (32 mm, 38 mm và 30mm), ISP có HT (31 mm, 39 mm và 32mm). Đây là một đặc điểm thuận lợi cho việc có thể sử dụng thay thế được nhiều nguồn dinh dưỡng khác nhau trong công nghệ lên men sản xuất CKS.
Để lựa chọn được thời điểm lên men thích hợp cho thu CKS cho hiệu quả cao nhất, chúng tôi đã kết hợp khảo sát tìm thời gian lên men thích hợp nhất. Kết quả cho thấy, tại thời điểm 72 giờ chất kháng sinh đã được hình thành nhưng hoạt tính còn thấp do tốc độ sinh tổng hợp chất kháng sinh chưa cao, dịch lên men tại 168h có hoạt tính cao nhất và đồng đều ở tất cả các loại VSV kiểm định, chứng tỏ trong khoảng thời gian này tốc độ sinh tổng hợp chất kháng sinh là cao nhất nên lượng kháng sinh được tích lũy trong môi trường nhiều nhất.
Để tổng hợp chất kháng sinh, xạ khuẩn cần thiết phải có các nguồn dinh dưỡng cacbon, nitơ, các nguyên tố khoáng, các chất sinh trưởng....và còn phụ thuộc rất nhiều vào các giai đoạn của pha sinh trưởng của chúng Tuy nhiên, nhu cầu sử dụng các nguồn dinh dưỡng rất khác nhau giữa các chủng giống, các giai đoạn. Nhiều trường hợp dư thừa glucose hay amon trong môi trường có thể dẫn đến làm ức chế quá trình tổng hợp chất kháng sinh .
Như vậy, với mục đích lựa chọn ra môi trường lên men và thời gian lên men thích hợp cho chủng TT1.2 để có HTKS cao nhất căn cứ từ kết quả trên, chúng tôi đã lựa chọn môi trường A4 – H, chọn thời gian lên men là 168 giờ để sử dụng cho các nghiên cứu lên men CKS tiếp theo.
Các kết quả nghiên cứu của chúng tôi cũng phù hợp với các kết quả đã công bố trước đây khi nghiên cứu khả năng tổng hợp chất kháng sinh của xạ khuẩn [13].