3.1.1. Tỏch chiết ADN tổng số từ 64 mẫu mỏu dờ sữa.
Cỏc mẫu mỏu lấy tại Trung tõm Nghiờn cứu Dờ và Thỏ - Sơn Tõy - Hà Nội và đƣợc chống đụng bằng EDTA 0,5M; giữ trong ống EDTA và bảo quản lạnh trong ngăn mỏt tủ lạnh trƣớc khi tỏch ADN.
Hỡnh 3.1. Điện di đồ ADN tổng số tỏch từ mẫu mỏu dờ
Chỳ thớch: M: Lambda ADN/HindIII marker
Chỳng tụi đó tỏch thành cụng ADN tổng số từ mẫu mỏu của 64 cỏ thể dờ gồm 30 mẫu của giống Alpine và 34 mẫu của giống Saanen bằng hai bộ kit: DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) và Genomic DNA Purification Kit (Fermentas).
Sản phẩm ADN tổng số đƣợc bảo quản lõu dài ở -20oC để sử dụng cho cỏc phản ứng tiếp theo.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 50 -
3.1.2. Kết quả AS-PCR với cặp mồi (CEX19F-CEX19R -CEX19L)
Phản ứng PCR với cặp mồi (CEX19F- CEX19R -CEX19L)
Hỡnh 3.2. Điện di đồ sản phẩm PCR của cỏ thể cú kiểu gen A*A*, A*E và EE
Chỳ thớch: M: GenRuler™ 50 bp ADN Ladder, A*: alen non-E. 1, 2, 6: EE; 4,
5, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 15: A*A*; 3, 8, 14: A*E
Kết quả điện di cho thấy ngoài cỏc băng 437 bp và 583 bp vẫn cũn cỏc băng tạp nhƣng mờ hơn. Kết quả này phự hợp với kết quả của M.L. Dettori và cộng sự cụng bố năm 2009 [57]. Dựa vào ảnh điện di cú thể xỏc định chớnh xỏc kiểu gen CSN1S1 của cỏ thể nghiờn cứu cú mang alen E hay khụng. Kiểu gen EE chỉ cho một băng sỏng rừ nằm giữa băng marker 400 bp và 500 bp. Nếu kiểu gen CSN1S1 khụng cú alen E sẽ cho một băng sỏng rừ nằm giữa băng marker 500 bp và 600 bp. Nếu cỏ thể mang alen E và một alen khụng phải E sẽ cho 2 băng sỏng rừ.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 51 -
Cỏc mẫu cú alen khụng phải E sẽ chạy tiếp phản ứng PCR-RFLP để xỏc định rừ alen khụng phải E đú là alen nào.
Kết quả cho thấy trong 64 mẫu nghiờn cứu 16 mẫu mang kiểu gen EE, 15 mẫu mang kiểu gen A*E, 33 mẫu mang kiểu gen A*A*. Nhƣ vậy sẽ cú 48 mẫu phải tiếp tục chạy phản ứng PCR-RFLP để xỏc định rừ kiểu gen.
3.1.3. Kết quả PCR-RFLP với cặp mồi (XR-XF)
Hỡnh 3.3. Điện di đồ cỏc cỏ thể cú alen non-E Chỳ thớch: M: GenRuler™ 50 bp ADN Ladder
Kết quả điện di cho 1 băng rừ nột 213/223 chứng tỏ cặp mồi (XR-XF) cú tớnh đặc hiệu cao. Alen B*( B1, B2, B3, B4, C, L), E, F cho băng 223 bp; alen A* (A, G, H, I, O1, O2) cho băng 213 bp. Ở nồng độ gel agarose 2% khụng phõn biệt đƣợc băng 213 bp và băng 223 bp nờn phải dựa vào phản ứng cắt bằng enzyme giới hạn để xỏc định rừ hơn cỏc alen này.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 52 -
Phản ứng cắt sản phẩm PCR với cặp mồi (XR-XF) bằng enzyme XmnI
Hỡnh 3.4. Điện di đồ sản phẩm PCR cắt bằng enzyme XmnI. Điện di trờn gel agarose 2%.
Chỳ thớch: M: GenRuler™ 50 bp
ADN Ladder
Bằng phƣơng phỏp điện di trờn gel agarose 2% chỳng tụi phõn biệt đƣợc alen yếu F cho băng 223 bp (khụng cú điểm cắt của enzyme XmnI), alen trung bỡnh E và alen mạnh B cho 2 băng (63 + 161) bp, alen A cho 2 băng (63 + 150) bp. Ở nồng độ gel này chỳng tụi chƣa phõn biệt đƣợc băng 150 bp và 161 bp nờn chƣa phõn biệt đƣợc 2 alen mạnh A* và B*.
Kết hợp kết quả PCR-RFLP và kết quả AS-PCR với cặp mồi (CEX19F- CEX19R - CEX19L) chỳng tụi phõn biệt đƣợc nhúm alen mạnh (A + B), alen trung bỡnh E, alen yếu F.
3.1.4. Tần số kiểu gen (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.1.4.1. Tần số kiểu gen của dờ Alpine
Bảng 3.1. Kiểu gen cỏc cỏ thể dờ nghiờn cứu
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 53 - 1 640 AA 2 970 AA 3 300 AA 4 1084 AA 5 1186 AA 6 1082 AE 7 1086 AF 8 1274 AF 9 1300 AF 10 1196 EE 11 1050 EE 12 748 EE 13 964 EE 14 162 EE 15 760 EE 16 952 EE 17 1288 EE 18 812.2 EE 19 634 EF 20 180 EF 21 716 EF 22 812 EF 23 1048 EF
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 54 - 24 1090 EF 25 1194 EF 26 258 FF 27 152 FF 28 650 FF 29 872 FF 30 68 FF
Chỳ thớch: trong bảng này chỳng tụi sử dụng kớ hiệu A để chỉ nhúm alen mạnh (A + B).
Bảng 3.2. Thành phần kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Alpine nghiờn cứu
Kiểu gen n Tần số (f) EE 9 0,30 EF 7 0,23 FF 5 0,17 AA 5 0,17 AF 4 0,13
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 55 -
Hỡnh 3.5. Tần số cỏc kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Alpine
Thành phần kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Alpine nghiờn cứu gồm cỏc kiểu gen EE, EF, FF, AA và AF với cỏc tần số (f) tƣơng ứng là 0,30; 0,23; 0,17; 0,17 và 0,13. Kiểu gen EE cú tần số cao nhất (f = 0,30), kiểu gen AF cú tần số thấp nhất (f = 0,13). Nhỡn chung trong nhúm cỏ thể này kiểu gen trung bỡnh và yếu chiếm đa số.
3.1.4.2. Tần số kiểu gen của dờ Saanen
Bảng 3.3. Kiểu gen của cỏc cỏ thể dờ Alpine nghiờn cứu
Số thứ tự Số tai Kiểu gen
1 622 AA
2 386 AA
3 740 AA
4 26 AA
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 56 - 6 1226 AA 7 766 AF 8 840 AF 9 986 AF 10 1074 AF 11 1222 AF 12 1244 AF 13 12 EE 14 870 EE 15 1224 EE 16 1264 EE 17 1066 EE 18 1222.2 EE 19 1402 EE 20 852 EF 21 18 EF 22 614 EF 23 712 EF 24 880 EF 25 1664 EF 26 762 EF 27 1246 EF 28 362 FF
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 57 - 29 254 FF 30 234 FF 31 842 FF 32 768 FF 33 642 FF 34 1068 FF
Bảng 3.4. Thành phần kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Saanen nghiờn cứu
Kiểu gen n Tần số (f) EF 8 0,24 EE 7 0,21 FF 7 0,21 AA 6 0,18 AF 6 0,18
Thành phần kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Saanen nghiờn cứu gồm cú cỏc kiểu gen EF, EE, FF, AA và AF với cỏc tần số (f) tƣơng ứng là 0,24; 0,21; 0,21; 0,18 và 0,18. Kiểu gen EF cú tần số cao nhất (f = 0,24); kiểu gen AA và AF cú tần số thấp nhất (f = 0,18). Nhỡn chung trong nhúm cỏ thể này kiểu gen trung bỡnh và yếu chiếm đa số.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 58 -
Hỡnh 3.6. Tần số cỏc kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Alpine
So sỏnh kết quả trờn với cỏc kết quả của cỏc tỏc giả khỏc:
Hai giống dờ nghiờn cứu: Kiểu gen trung bỡnh và yếu chiếm tỉ lệ lớn (64 - 70%) trong khi kiểu gen mạnh chiếm tỉ lệ nhỏ hơn (30-36 %).
Nghiờn cứu trờn 347 cỏ thể dờ ở Ấn Độ: Kiểu gen mạnh AA cú tần số cao nhất (71,4-100%).
Nghiờn cứu ở dờ Mexico: Saanen cú 22,7% kiểu gen mạnh, Alpine cú 55,4 % kiểu gen mạnh. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nghiờn cứu trờn 2 giống dờ tự nhiờn của Sộc: White Shorthair cú 52,0% kiểu gen mạnh, Brown Shorthair cú 55,1% kiểu gen mạnh.
Nhỡn chung tần số kiểu gen mạnh ở cỏc giống dờ ở cỏc quốc gia khỏc nhau cú nhiều sự khỏc biệt do nguồn gốc giống cũng nhƣ cụng tỏc chọn giống.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 59 -
Trong cụng tỏc chọn giống nờn ƣu tiờn chọn cỏ thể cú kiểu gen mạnh để cú năng suất và chất lƣợng sữa cao hơn.
3.1.4. Tần số alen
3.1.4.1. Tần số alen của dờ Alpine
Bảng 3.5. Tần số alen và tần số kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Alpine
Kiểu gen Tần số (f) EE 0,30 EF 0,23 FF 0,17 AA 0,17 AF 0,13 Alen Tần số (f) A 0,23 E 0,42 F 0,35
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 60 -
Kết quả nghiờn cứu trờn giống dờ sữa Alpine của Phỏp đƣợc nuụi tại Trung tõm Nghiờn cứu Dờ và Thỏ - Sơn Tõy - Ba Vỡ - Hà Nội chỳng tụi đó phỏt hiện đƣợc cỏc alen A, E và F. Alen E cú tần số cao nhất là f = 0,42; tiếp đến là alen F cú tần số là f = 0,35 và alen A cú tần số thấp nhất là f = 0,23. Nhƣ vậy trong nhúm cỏ thể này đa số là cỏc alen trung bỡnh và yếu. Kết quả này khỏ tƣơng đồng với tần số alen của Alpine ở Phỏp và khỏc so với tần số alen của Alpine của Italia và Mexico (Phụ lục 2).
3.1.4.2. Tần số alen của dờ Saanen
Bảng 3.6 Tần số alen và tần số kiểu gen của nhúm cỏ thể dờ Saanen
Kiểu gen Tần số (f) EF 0,24 EE 0,21 FF 0,21 AA 0,18 AF 0,18 Alen Tần số (f) A 0,27 E 0,33 F 0,40
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 61 -
Hỡnh 3.8. Tần số alen nhúm cỏ thể dờ Saanen nghiờn cứu
Kết quả nghiờn cứu trờn giống dờ sữa Saanen của Phỏp đƣợc nuụi tại Trung tõm Nghiờn cứu Dờ và Thỏ - Sơn Tõy - Hà Nội chỳng tụi đó phỏt hiện đƣợc cỏc alen A, E và F. Alen F cú tần số cao nhất là f = 0,40 tiếp đến là alen E cú tần số f = 0,33 và alen A cú tần số thấp nhất là f = 0,27. Nhƣ vậy trong nhúm cỏ thể này đa số là cỏc alen trung bỡnh và yếu. Điều này tƣơng tự nhƣ ở dờ Saanen của Phỏp và Mexico (Phụ lục 2).
* So sỏnh tần số alen của 2 giống dờ nghiờn cứu và cỏc giống dờ ở cỏc nƣớc khỏc
So sỏnh giữa 2 giống dờ sữa ta thấy ở giống Alpine cú tần số alen trung bỡnh (alen E) cao hơn giống dờ Saanen nhƣng tần số alen mạnh (alen A) và alen yếu (alen F) lại thấp hơn. Điểm giống nhau là alen trung bỡnh và yếu chiếm đa số, điều này tƣơng đồng với tần số alen của dờ Alpine và Saanen của Phỏp. Tần số alen CSN1S1 khỏc nhau giữa cỏc giống dờ và ngay cả trong cựng một giống dờ nuụi ở cỏc quốc gia khỏc nhau (Phụ lục 2).
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 62 -
Hỡnh 3.9. Biểu đồ tần số alen của 2 giống dờ nghiờn cứu
3.2. CÁC CHỈ TIấU HểA SINH CỦA SỮA Dấ 3.2.1. Phõn tớch cỏc chỉ tiờu húa sinh của sữa dờ 3.2.1. Phõn tớch cỏc chỉ tiờu húa sinh của sữa dờ 3.2.1.1. Hàm lƣợng protein trong sữa
Bảng 3.7. Hàm lƣợng protein trong sữa của cỏc kiểu gen nghiờn cứu
Kiểu gen Hàm lƣợng protein trong sữa (g/l)
Alpine AE 34,80 EE 32,45 EF 25,82 FF 27,44 Saanen AA 36,81 AF 32,38 EE 30,75
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 63 - (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
EF 28,86
FF 24,07
Hỡnh 3.10. Biểu đồ so sỏnh hàm lƣợng protein trong sữa của cỏc kiểu gen
Qua bảng 3.7 và hỡnh 3.10 ta thấy ở giống dờ Saanen hàm lƣợng protein trong sữa cao nhất là kiểu gen AA (36,81 g/l), thấp nhất là kiểu gen FF (24,07 g/l); ở giống dờ Alpine hàm lƣợng protein trong sữa cao nhất là kiểu gen AE (34,80 g/l), thấp nhất là kiểu gen FF (27,44 g/l). Nhỡn chung hàm lƣợng protein trong sữa của kiểu gen AA lớn hơn kiểu gen EE, hàm lƣợng protein trong sữa thấp nhất là kiểu gen FF vỡ vậy khi chọn giống tốt nhất nờn chọn kiểu gen mạnh để cú hàm lƣợng protein trong sữa cao hơn. Giống dờ Saanen cú hàm lƣợng protein trong sữa cao hơn dờ Alpine tuy nhiờn sự khỏc biệt là khụng lớn.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 64 -
3.2.1.2. Hàm lƣợng casein trong sữa
Bảng 3.8. Hàm lƣợng casein trong sữa của cỏc kiểu gen nghiờn cứu
Kiểu gen Hàm lƣợng casein trong sữa (g/l)
Alpine AE 28,70 EE 23,59 EF 18,79 FF 24,47 Saanen AA 31,13 AF 26,48 EE 25,45 EF 22,67 FF 18,05
Qua bảng 3.8 và hỡnh 3.11 ta thấy ở giống dờ Saanen hàm lƣợng casein trong sữa cao nhất là kiểu gen AA (31,13 g/l), hàm lƣợng casein trong sữa thấp nhất là kiểu gen FF (18,05 g/l); ở giống dờ Alpine hàm lƣợng casein trong sữa cao nhất là kiểu gen AE (28,70 g/l), hàm lƣợng casein trong sữa thấp nhất là kiểu gen EF (18,79 g/l). Nhỡn chung hàm lƣợng casein trong sữa của kiểu gen AA lớn hơn kiểu gen EE, hàm lƣợng casein trong sữa thấp nhất là kiểu gen FF. Vỡ vậy khi chọn giống tốt nhất nờn chọn kiểu gen mạnh để cú hàm lƣợng casein trong sữa cao hơn.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 65 -
Hỡnh 3.11. Biểu đồ so sỏnh hàm lƣợng casein trong sữa của cỏc kiểu gen
3.2.1.3. Hàm lƣợng lipid trong sữa
Qua bảng 3.9 và hỡnh 3.12 ta thấy ở giống dờ Saanen hàm lƣợng lipid cao trong sữa nhất là kiểu gen AF (44,44 g/l), hàm lƣợng lipid cao trong sữa thấp nhất là kiểu gen FF (22,73 g/l); ở giống dờ Alpine hàm lƣợng lipid cao trong sữa cao nhất là kiểu gen AE (30,14 g/l), hàm lƣợng lipid cao trong sữa thấp nhất là kiểu gen FF (22,31 g/l). Nhỡn chung hàm lƣợng lipid trong sữa của dờ Saanen cao hơn dờ Alpine.
Bảng 3.9. Hàm lƣợng lipid trong sữa của cỏc kiểu gen nghiờn cứu
Kiểu gen Hàm lƣợng lipid trong sữa (g/l)
Alpine AE 30,14
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 66 - EF 24,67 FF 22,31 Saanen AA 33,52 AF 44,44 EE 29,44 EF 31,72 FF 22,73
Hỡnh 3.12. Biểu đồ so sỏnh hàm lƣợng lipid trong sữa của cỏc kiểu gen
3.2.1.4. Hàm lƣợng lactose trong sữa
Bảng 3.10. Hàm lƣợng lactose trong sữa của cỏc kiểu gen nghiờn cứu
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn - 67 - Alpine AE 53,00 EE 50,69 EF 48,00 FF 51,67 Saanen AA 56,13 AF 44,24 EE 47,09 EF 47,55 FF 50,27
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 68 -
Qua bảng 3.10 và hỡnh 3.13 ta thấy ở giống dờ Saanen hàm lƣợng lactose trong sữa cao nhất là kiểu gen AA (56,13 g/l), thấp nhất là kiểu gen AF (44,24 g/l); ở giống dờ Alpine hàm lƣợng lactose trong sữa cao nhất là kiểu gen AE (53,00 g/l), thấp nhất là kiểu gen EF (48,00 g/l). Nhỡn chung hàm lƣợng lactose giữa cỏc kiểu gen CSN1S1 cú sự biến đổi khụng tuõn theo kiểu gen mạnh hay yếu, cũng cú thể do số lƣợng mẫu chƣa đủ lớn để kết luận về quy luật trong trƣờng hợp này.
3.2.2. Phõn tớch cỏc chỉ tiờu húa sinh sữa cỏc kiểu gen CSN1S1
Bảng 3.11. Cỏc chỉ tiờu chất lƣợng sữa của cỏc kiểu gen của dờ Alpine
Kiểu gen Protein tổng số Lipid tổng số Lactose Casein (g/l) (g/l) (g/l) (g/l) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
AE 34,80 30,14 53,00 28,70
EE 32,45 23,11 50,69 23,59
EF 25,82 24,67 48,00 18,79
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- 69 -
Hỡnh 3.14. Biểu đồ so sỏnh cỏc chỉ tiờu chất lƣợng sữa của cỏc kiểu gen CSN1S1 của dờ Alpine
Qua bảng 3.11 và biểu đồ hỡnh 3.14 ta thấy: ở giống dờ sữa Alpine cỏc cỏ thể cú kiểu gen AE cú cỏc chỉ tiờu chất lƣợng sữa, hàm lƣợng protein tổng số trong sữa (34,81g/l), hàm lƣợng casein trong sữa (28,70 g/l), hàm lƣợng lipid trong sữa (30,14 g/l) và hàm lƣợng lactose trong sữa (53,00 g/l) cao hơn cỏc cỏ thể cú 3 kiểu gen EE, FF và EF.
Bảng 3.12. Cỏc chỉ tiờu chất lƣợng sữa của cỏc kiểu gen của dờ Saanen
Kiểu gen Protein tổng số Lipid tổng số Lactose Casein