Vi khuẩn Bacillus thuringiensis được chia thành nhiều dưới loài khác nhau. Các dưới loài được phân loại nhờ phản ứng ngưng kết với typ huyết thanh đặc trưng của chúng. Dưới loài Bacillus thuringiensis subsp. aizawai thuộc typ huyết thanh H7.
Để sàng lọc các chủng Bt thuộc dưới loài Bacillus thuringiensis subsp. aizawai từ 26 chủng Bt sinh tinh thể cầu và lưỡng tháp, chúng tôi sử dụng phương pháp huyết thanh học đã mô tả trong mục 2.2.1 với bộ 56 huyết thanh do phòng Di truyền Vi sinh cung cấp. Các chủng Bt thuộc dưới loài Bacillus thuringiensis subsp. aizawai sẽ có phản ứng ngưng kết với typ huyết thanh H7 . Kết quả phân loại dưới loài được thể hiện ở hình 3.3 và bảng 3.2.
Bảng 3.2. Kết quả phân loại dƣới loài của các chủng Bt sinh tinh thể
STT Dưới loài Bacillus
thuringiensis Typ huyết thanh Số chủng ngưng kết Tỷ lệ (%) 1 toguchini 31 1 3,84 2 aizawai 7 10 38,46 3 tochigiensis 19 2 7,69 4 asturiensis 53 1 3,85 5 thuringensis 1 5 19,23 6 sotto 4 1 3,85 7 tolworthi 9 1 3,85 8 canadensis 5 2 7,69 9 kim 52 2 7,69 10 Không ngưng kết 1 3,85 Tổng 9 26 100 Hình 3.3. Hình ảnh ngƣng kết của chủng 4J4 (A) và TN 6.12 (B) với typ huyết thanh H7 dƣới kính hiển vi quang học
Kết quả phân loại cho thấy có 25/26 chủng có phản ứng ngưng kết với 56 loại huyết thanh được dùng để thử. Các chủng ngưng kết thuộc về 9 dưới loài khác nhau. Trong tổng số 9 dưới loài đã được phân loại, có 2 dưới loài chiếm ưu thế, trong đó dưới loài aizawai chiếm tới 38,46%, xếp thứ hai là dưới loài thuringiensis
chiếm 19,23%, các dưới loài còn lại chiếm tỷ lệ từ 3,84% đến 7,69%. Ngoài ra, trong tổng số 26 chủng có 1 chủng không ngưng kết với bất kỳ typ huyết thanh nào. Đây có thể là các chủng thuộc các dưới loài khác hoặc dưới loài mới chưa được phát hiện.
Các chủng Bt được phân loại sẽ được bổ sung vào tập đoàn chủng giống Bt của phòng Di truyền Vi sinh vật, 10 chủng Bta đã phân loại được bằng phương pháp huyết thanh học kể trên, chúng tôi sử dụng cho các bước sàng lọc tiếp theo.