Cấy giữ giống
Ria các chủng vi sinh vật chỉ thị lên trên đĩa thạch NB theo đường zit zăt sau đó ủ trong tủ ấm ở 37oC trong 24 giờ.
Hoạt hóa giống
Sau khi cấy khuẩn lạc của vi sinh vật chỉ thị vào 5 ml môi trường canh NB, đem lắc ổn nhiệt ở 300C. Sau 24 giờ vi sinh vật chỉ thị sinh trưởng và làm đục môi trường.
Hình 3.1 Hình đại diện hình thái khuẩn lạc vi sinh vật chỉ thị trên môi trường thạch NB (hình B. subtilis)
3.2. Ly tâm thu dịch chiết 3.2.1. Dịch chiết tỏi 3.2.1. Dịch chiết tỏi
Sau khi tỏi tươi được bóc vỏ, nghiền nhỏ, ngâm dung môi và ly tâm lạnh (đối với dung môi là cồn thực phẩm) hoặc lọc vô trùng (đối với dung môi là nước cất vô trùng), thu được dịch chiết tỏi.
Hình 3.3 Tỏi trước ly tâm
3.2.2. Dịch chiết sả
Sau khi sả tươi được rửa sạch, để ráo, thái mỏng, xay nhỏ, ngâm dung môi (cồn thực phẩm, methanol, acetone, nước sôi) và đem di ly tâm lạnh, thu được dịch chiết sả.
Hình 3.5 Sả trước ly tâm
3.3. Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết tỏi, lá sả lá sả
Tiến hành thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết từ tỏi, lá sả bằng phương pháp “khuếch tán trên giếng thạch” trên môi trường NB (Nutrient Broth) với các loại vi khuẩn chỉ thị như: E. coli, B. subtilis, S. aureus với kháng sinh chuẩn sử dụng là ampicillin.
3.3.1. Kết quả
Đường kính vòng tan được tính theo công thức
d = d1- d2
Trong đó:
d: đường kính vòng tan
d1: đường kính vòng tan tính từ tâm lỗ thạch d2: đường kính lỗ thạch (8cm)
Các quy ước trong các hình thử hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết tỏi, sả trong đĩa môi trường NB agar ở các loại vi sinh vật chỉ thị:
- 1: cồn thực phẩm ở 700 acetone, methanol ở nồng độ 70% - 2: cồn thực phẩm ở 750 acetone, methanol ở nồng độ 75% - 3: cồn thực phẩm ở 800 acetone, methanol ở nồng độ 80% - 4: cồn thực phẩm ở 850 acetone, methanol ở nồng độ 85% - 5: cồn thực phẩm ở 900 acetone, methanol ở nồng độ 90% - 6: nước sôi - 7: nước cất vô trùng - 8: kháng sinh ampicillin - 9: kháng sinh erythromycin