phương pháp disc diffusion assay (khuếch tán qua vịng giấy lọc)
Chuẩn bị: Giấy lọc đường kính 8mm
Mơi trường Peptone water 8ml mỗi ống nghiệm
Dịch nuơi cấy E.coli (21h, 370C) . Pha lỗng 10-2 được nồng độ sử dụng là 105 tế bào/ml
Dịch nuơi cấy LAB trong MRS lỏng 18- 24h, ở 370C Cách thực hiện:
Đổ đĩa mt BHI agar (2%) Trải 0.1 ml dịch chứa E.coli
Ly tâm dịch nuơi cấy LAB Cho 20µl dịch ly tâm Đặt giấy thấm
Ủ hiếu khí 24h, 370C
Kiểm tra sự tạo vịng kháng. Đo đường kính vịng kháng
LAB sau khi nuơi cấy trong MRS lỏng qua đêm 18-24h, lấy 1,2ml dịch nuơi cấy cho vào ống effendorf, đem ly tâm 14000prm trong 10 phút.
Đặt năm miếng giấy thấm trên bề mặt agar.
Đối chứng: miếng ở trung tâm chỉ thấm vào MRS broth Giấy thấm phải được khử trùng trước khi sử dụng.
Dùng kẹp khử trùng qua ngọn lửa đèn cồn để gắp giấy thấm.
3.2.3.4. Thí nghiệm kiểm tra khả năng đối kháng bằng
phương pháp Agar well diffusion assay (khuếch tán qua giếng thạch)
Chuẩn bị: Dịch nuơi cấy E.coli (21h, 370C) . Pha lỗng 10-1, 10-2 được nồng độ sử dụng là 105-106 tế bào/ml. Khảo sát hai nồng độ này
Dịch nuơi cấy LAB trong MRS lỏng 18- 24h, ở 370C. Đem ly tâm 14000 vịng/ phút, trong 10 phút. Loại bỏ sinh khối.
Khảo sát độ dày mơi trường là 5mm tương ứng với 25ml mơi trường/đĩa, 3mm tương ứng với 15ml mơi trường/đĩa.
Cách thực hiện:
Trải 0.1 ml dịch chứa E.coli mơi trường BHI agar (2%) Đục lổ trên thạch đường kính 8mm
Lấy 0.1ml dịch nuơi cấy LAB (nuơi cấy kị khí 24h, 370C) vào lỗ. Ủ hiếu khí, 370C, 18-24h
Kiểm tra sự tạo vịng kháng. Đo đường kính vịng kháng Quá trình đục lỗ: Mở nắp đĩa petri, dùng ống đồng đường kính 8mm, khử trùng trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội, đục 5 lỗ trên thạch. Lấy que gắp, khử trùng, để nguội, gắp thạch ra khỏi tạo giếng thạch. Hơ khử trùng nắp petri, đậy nắp petri.
Đối chứng: giếng ở trung tâm đĩa, cho 0.1ml MRS broth để đối chứng.
3.2.3.4 Thí nghiệm xác định khả năng đối kháng bằng phươngpháp Turbidometricassay (đo độ đục)