Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Phương pháp thu thập số liệu và tiêu chuẩn đánh giá sử dụng trong nghiên cứu
2.4.3. Phương pháp lấy dịch rửa phế quản qua nội soi phế quản ống mềm
* Quy trình nội soi PQ ống mềm.
+ Chuẩn bị bệnh nhân: trước khi soi giải thích cho bệnh nhân lợi ích và sự cần thiết của việc soi PQ để bệnh nhân yên tâm hợp tác với thầy thuốc, giúp thủ thuật tiến hành thuận lợi an toàn.
+ Chuẩn bị đầy đủ các xét nghiệm cần thiết cho cuộc soi: các xét nghiệm thường quy, phim chụp HRCT.
+ Bệnh nhân nhịn ăn, uống trước khi soi 03 giờ để tránh tai biến.
+ Chuẩn bị dụng cụ: Bình xịt Lidocain 10%, dung dịch Lidocain 2%, dung dịch Natriclorua 0,9%. Ống soi mềm. Hệ thống oxy, máy theo dõi, máy hút.
+ Các phương tiện khác: Ống nghiệm vô khuẩn, lam kính, các đĩa thạch tại khoa vi sinh.
+ Ống soi phế quản: ống soi Olympus ký hiệu OVT- F3. Đặc điểm ống soi: đường kính ống soi là 2,2mm, ống soi dài 70cm, cỡ ống soi 5,6,mm.
Nguồn sáng Xenon và nguồn sáng Halogen. Màn hình SONY 16 inch.
+ Khi soi thủ thuật viên phải đi găng tay vô khuẩn, đội mũ, đeo khẩu trang. Các bệnh phẩm lấy trong quá trình nội soi như hút dịch PQ, rửa phế nang phải được gửi đến phòng xét nghiệm trong 2 giờ sau khi lấy ra.
+ Tiến hành nội soi PQ: Cuộc soi được thực hiện tại phòng soi PQ có đầy đủ thuốc men và dụng cụ cấp cứu khi cần thiết. Dùng bình xịt có dung
dịch Lidocain 10% xịt họng để gây tê nền lưỡi (thường xịt 2-3 lần). Tiếp theo, dùng bình xịt 2% xịt vào 2 lỗ mũi mỗi bên 2 -3 lần, mỗi lần 2-3 xịt, hướng dẫn bệnh nhân hít đồng thời khi xịt thuốc. Tư thế bệnh nhân nằm ngửa trên bàn soi.
- Thao tác soi PQ: Đưa ống soi qua lỗ mũi hoặc miệng nếu lỗ mũi hẹp.
Nếu đưa ống soi qua miệng phải dùng dụng cụ bảo vệ (cannun) để tránh bệnh nhân cắn phải ống soi. Gây tê bổ xung từ thanh môn tới các PQ với dung dịch Lidocain 2% bơm qua ống soi. Soi bên phổi lành trước song mới soi bên phổi bị bệnh.
Khi kết thúc cuộc soi rút từ từ ống soi, lưu ý các vị trí đã tiến hành lấy bệnh phẩm xem còn chảy máu không để xử lý kịp thời. Hút hết dịch đọng trên đường rút ống soi.
* Kỹ thuật rửa PQ.
Trước khi tiến hành nội soi PQ phải xem kỹ lại phim HRCT phổi để xác định chính xác vùng định rửa. Kỹ thuật này phải được thực hiện đầu tiên trong quá trình soi PQ. Đưa ống soi đến phân thùy định tiến hành rửa PQ - phế nang. Bơm từ từ 50ml dung dịch natriclorua 0,9% vào trong lòng PQ, vừa bơm vừa quan sát. Giữ nguyên ống soi hút nhẹ nhàng để lấy dịch rửa ra.
Bơm khoảng 3 lần, mỗi lần 50ml, tổng lượng dung dịch không quá 150ml. Để riêng 20ml dung dịch ban đầu. Dịch rửa PQ - phế nang được sử dụng để làm xét nghiệm vi khuẩn thông thường, AFB.
- Thời gian nội soi PQ: trong 2 ngày đầu sau khi nhập viện. Riêng với những bệnh nhân có ho máu mức độ trung bình và ho máu mức độ nhiều thì phải đợi sau khi cầm máu 2 - 3 ngày mới nội soi phế quản.
- Địa điểm và người thực hiê ̣n: ta ̣i phòng nội soi khoa Khám bệnh yêu cầu Bệnh viện Trung ương Thái Nguyên do giáo viên hướng dẫn và học viên trực tiếp thực hiê ̣n.
Mẫu bệnh phẩm được lấy qua dịch rửa PQ đúng quy trình cho ngay vào ống nghiệm vô khuẩn, đậy nút, đưa đến khoa vi sinh trong vòng một giờ đầu tiên để cấy vi khuẩn
Bảo quản: Bảo quản ở nhiệt độ phòng và xử lý trước 2 giờ.
* Quy trình xét nghiệm vi sinh - Vật liệu:
+ Các chế phẩm để nuôi cấy, phân lập và xác định vi khuẩn + Các khoanh giấy kháng sinh
- Phương pháp xác định vi khuẩn:
Bệnh phẩm sau khi đã xử lý được cấy phân vùng trên 3 loại môi trường:
+ Thạch máu, ủ 370 C/24 giờ với 3-5% CO2
+ Thạch chocolate, ủ 370 C/24 giờ với 3-5% CO2
+ Thạch MacConkey, ủ 370 C/24 giờ
- Mô tả đặc điểm hình thái của các khuẩn lạc mọc trên mặt đĩa môi trường thạch dinh dưỡng.
- Nhuộm Gram vi khuẩn được chọn từ các khuẩn lạc nghi ngờ.
* Định danh vi khuẩn:
Căn cứ đặc điểm hình thái khuẩn lạc trên môi trường nuôi cấy; hình dạng, cách sắp xếp và tính chất bắt màu của tế bào vi khuẩn trên tiêu bản nhuộm Gram để định hướng cho quá trình phân lập và xác định vi khuẩn tiếp theo.
Khảo sát các tính chất hóa sinh của vi khuẩn: Chọn khuẩn lạc vi khuẩn nghi ngờ, cấy chuyển sang các môi trường xác định tính chất hóa sinh phù hợp. Đối chiếu kết quả các tính chất sinh hóa thu được với tiêu chuẩn các tính chất hóa sinh đặc trưng cho mỗi loại/nhóm vi khuẩn để xác định tên chủng vi khuẩn gây bệnh.
Thực hiện phản ứng ngưng kết với các kháng huyết thanh mẫu đơn giá hoặc đa giá để định type huyết thanh chủng vi khuẩn gây bệnh phân lập được.
* Kĩ thuật kháng sinh đồ xác định độ nhạy cảm với kháng sinh của các chủng phân lập được (Kháng sinh đồ định tính)
+ Tiến hành theo kỹ thuật kháng sinh đồ phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán trong thạch (Kỹ thuật Kirby - Bauer).
+ Lựa chọn các loại khoanh giấy kháng sinh phù hợp với loại vi khuẩn đã được định danh.
+ Đặt các khoanh giấy kháng sinh đã chọn lên mặt đĩa thạch Mueller- Hinton (mặt thạch đã được ria cấy đều chủng vi khuẩn thuần chủng với số lượng khoảng 108 vi khuẩn/ml huyền dịch vi khuẩn). Để tủ ấm 370C/18-24 giờ cho vi khuẩn mọc. Đo đường kính vòng vô khuẩn xung quanh các khoanh giấy kháng sinh. So sánh kết quả đo được với giới hạn chuẩn của kháng sinh tương ứng để phân loại các mức độ nhạy cảm của vi khuẩn đó với kháng sinh được thử (nhạy cảm, trung gian, đề kháng).
* Nhuộm soi trực tiếp Zielh -Neelsen tìm AFB:
- Kỹ thuật làm tiêu bản:
+ Dàn tiêu bản: dịch rửa phế quản hoặc mẫu đờm của bệnh nhân được dàn đều lên mặt của một lam kính sạch.
+ Để phần bệnh phẩm dàn trên lam kính khô tự nhiên.
+ Cố định tiêu bản tiêu bản bằng nhiệt.
- Kỹ thuật nhuộm Ziehl-Neelsen:
+ Đặt lam kính lên giá đỡ của bể nhuộm, nhỏ dung dịch carbon fuchsin phủ kín mặt lam kính.
+ Hơ nóng mặt dưới lam kính để thuốc nhuộm bốc hơi đủ 3 lần. Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ.