Nguyên tắc: Mẫu đã được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường thạch chọn lọc thích hợp chứa lactose, ủở 440C trong 24 giờ, đếm các khuẩn lạc có hình dạng đặc trưng của Coliform. Khẳng định các khuẩn lạc đã đếm là E.coli bằng các thử nghiệm IMViC.
Môi trường và hóa chất
- Môi trường Tryptone Soya Agar (TSA) được chuẩn bị trong các bình hay các chai thủy tinh, hấp khử trùng và bảo quản ở 4-80C. Trước khi sử dụng, môi trường
được đun chảy và làm nguội ở 450C trong bể điều nhiệt.
- Violet Red Bile Agar (VRB) được chuẩn bị vô trùng trong các chai thủy tinh,
đun chảy và làm nguội ở nhiệt độ 450C trong bể điều nhiệt trước khi sử dụng. Có thể sử dụng môi trường Desoxycholate Agar thay cho VRB.
- Môi trường canh Lactose Tryptose Lauryl Sulphate Borth (LST Borth) được chuẩn bị tương tự như môi trường canh EC.
- Môi trường canh Tryptone Borth được chuẩn bị tương tự phần đinh lượng
Coliforms.
- Môi trường canh MR-VP Borth được phân phối 5ml vào mỗi ống nghiệm, hấp khử trùng, để nguội và bảo quản ở 2-80C cho đến khi sử dụng.
A (CFU/g hay CFU/ML) = N
n1Vf1 + … + n1Vf1
- Môi trường thạch Simmon Citrate được chuẩn bị dưới dạng các ống thạch nghiêng có màu xanh lục.
- Thuốc thử Kovac’s.
Quy trình phân tích
Mẫu đã được đồng nhất, pha loãng và đinh lượng tương tự như phần Coliform
phân với bước khẳng định được tiến hành như sau: Chọn 5 khuẩn lạc nghi ngờ, dùng que cấy vòng cấy chuyển sang môi trường canh EC, ủở 44±0,50C trong 24 giờ. Thực hiện thử nghiệm Indol, Methyl Red, Voges Proskauer, Citrate. Ghi nhận số khuẩn lạc cho thử nghiệm khẳng định E.coli (+) (IMViC là + + - -).
Cách tính kết quả
Tính tỉ lệ khẳng định và tính mật độ E.coli (CFU/ml hay CFU/mg) theo công thức sau:
Trong đó:
N: tổng số khuẩn lạc đếm được.
n1: số đĩa có số khuẩn lạc được chọn tại mỗi độ pha loãng. V: dung tích mẫu (ml) cấy vào mỗi đĩa.
f1: độ pha loãng có số khuẩn lạc được chọn tại các đĩa đếm. R: Tỉ lệ khẳng định.