3.1 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY NGẢI RỪNG (ARTEMISIA ROXBURGHIANA BESS.)
3.1.4 Phân tách các phần chiết lá cây Ngải rừng
3.1.4.1 Phân tách phần chiết n-hexan (ARH)
Phần chiết n-hexan (ARH) (45 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC, kớch thước cột 5 30 cm) trờn silica gel Merck (cỡ hạt 63-200 àm). Cột sắc ký được nhồi theo phương pháp nhồi ướt trong dung môi n-hexan và mẫu phân tách được đưa lên cột theo phương pháp tẩm mẫu trên silica gel. Sau khi mẫu đã đƣợc đƣa lên cột, tiến hành rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton với các tỷ lệ 19:1, 9:1, 6:1, và 3:1 (v:v) cho 63 phân đoạn, mỗi phân đoạn 150 ml.
Phân tích sắc ký lớp mỏng cho phép gộp các phân đoạn có sắc ký đồ giống nhau thành 12 nhóm phân đoạn, ký hiệu lần lƣợt từ ARH1 đến ARH12.
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan (ARH) đƣợc trình bày ở Sơ đồ 2.
Sơ đồ 2. Phân tách phần chiết n-hexan (ARH) Phần chiết n-hexan
(ARH) (45 g)
ARH1 ARH2 150 mg
ARH3 61 mg
ARH4 1,1 g
ARH5 0,8 g
ARH6 ARH7 0,4 g
ARH8 2 g CC, silica gel n-hexan-axeton, gradient
19:1, 9:1, 6:1, 3:1
Hỗn hợp
tinh thÓ AR3 1 g Rửa
bằng n- hexan
Rửa bằng n- hexan
ARH9 1,9 g
ARH10-12
Rửa bằng n- hexan
AR2 10 mg
AR4 30 mg
Rửa bằng axeto n
ARH5.
1
CC, silica gel n-hexan-
EtOAc 9:1, 6:1, 3:1
AR5 100
mg ARH5.
2
ARH5.
3
ARH5.
4
ARH5.
5
ARH5.
6
Mini-C, silica gel n-hexan-EtOAc 9:1, 6:1 AR6/AR7
92 mg AR12
5 mg
ARH7.1- 7.2
CC, silica gel
n-hexan- CH2Cl2 1:4, 1:9, 1:15
ARH7.
3
ARH7.
4
1) CC, silica gel n-hexan- axeton 9:1, 6:1 2) Mini-C, silica gel n-hexan- axeton 5:1 AR8 8 mg 1) CC,
silica gel n-hexan- axeton 12:1, 9:1, 6:1
2) Mini-C, RP-18 MeOH-H2O 7:3
AR14 3 mg
CC, silica gel
n-hexan- EtOAc 9:1, 6:1, ARH8. 3:1
4 Mini-C, silica gel n-hexan- EtOAc 9:1, 6:1 AR9 5 mg
ARH8.1 1
1) Mini-C, silica gel n-hexan-EtOAc 9:1, 6:1
AR8/AR14 10 mg AR1
20 mg
CC, silica gel
n-hexan- axeton 99:1, 49:1, 30:1
Dịch ARH5
CC, silica gel
n-hexan- EtOAc 6:1
2) Mini-C, RP-18 MeOH-H2O 7:3
CC, silica gel
n-hexan- axeton 6:1, 3:1, 1:1
AR10/AR1 1 65 mg
ARH7
Nhóm phân đoạn ARH2 (150 mg) đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột n-hexan-axeton cho một hỗn hợp rắn. Hỗn hợp này đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m), rửa giải với hệ dung môi n- hexan-axeton 99:1, 49:1, và 30:1, sau đó các phân đoạn nhận đƣợc đƣợc kết tinh trong axeton cho 3-oxofriedelan (AR1) (20 mg).
Nhóm phân đoạn ARH3 (61 mg) đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột n-hexan-axeton, sau đó các tinh thể nhận đƣợc đƣợc rửa nhiều lần bằng n-hexan cho hỗn hợp của 3-oxofriedelan và friedelan-3-ol (AR2) (10 mg).
Nhóm phân đoạn ARH4 (1,1 g) đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột n-hexan-axeton, sau đó các tinh thể nhận đƣợc đƣợc rửa nhiều lần bằng n-hexan cho roxbughianin A (AR3) (1 g).
Nhóm phân đoạn ARH5 (0,8 g) đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột n-hexan-axeton, sau đó các tinh thể nhận đƣợc đƣợc rửa bằng axeton cho axit tetracosanoic (AR4) (30 mg). Các phần dịch rửa đƣợc phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 63-100 m), rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-EtOAc 9:1, 6;1, và 3:1 cho 50 phân đoạn. Các phân đoạn đƣợc gộp thành 6 nhóm phân đoạn, ký hiệu từ ARH5.1 - ARH5.6, trên cơ sở các phân tích sắc ký lớp mỏng. Nhóm phân đoạn ARH5.2 đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 9:1 và 6:1 cho hỗn hợp docosyl p-coumarat (AR6) và tetracosyl p-coumarat (AR7) (92 mg). Nhóm phân đoạn ARH5.3 đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột cho β-sitosterol (AR5) (0,1 g). Nhóm phân đoạn ARH5.5 đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 15-40 m) với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 6:1 cho axit palmitic (AR12) (5 mg).
Nhóm phân đoạn ARH7 (0,4 g) đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi gradient n-hexan-CH2Cl2 1:4, 1:9 và 1:15 cho 35 phân đoạn. Các phân đoạn đƣợc gộp thành 4 nhóm phân đoạn, ký hiệu từ ARH7.1 - ARH7.4, trên cơ sở các phân tích sắc ký lớp mỏng. Nhóm phân đoạn ARH7.3 đƣợc phân tách lần lƣợt bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi n-hexan-axeton 12:1, 9:1, và 6:1, và
RP-SPE trên pha đảo RP-18 với hệ dung môi MeOH-H2O 7:3 cho 1,10- epoxyachillin (AR14) (3 mg). Nhóm phân đoạn ARH7.4 đƣợc phân tách lần lƣợt bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi n- hexan-axeton 9:1 và 6:1, và sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 15-40 m) với hệ dung môi n-hexan-axeton 5:1 cho achillin (AR8) (8 mg).
Nhóm phân đoạn ARH8 (2 g) đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 63-100 m) với hệ dung môi gradient n-hexan-EtOAc 9:1, 6:1, và 3:1 cho 145 phân đoạn. Các phân đoạn đƣợc gộp thành 15 nhóm phân đoạn, ký hiệu từ ARH8.1 - ARH8.15, trên cơ sở các phân tích sắc ký lớp mỏng.
Nhóm phân đoạn ARH8.4 đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi n-hexan-EtOAc 9:1 và 6:1 cho axit eicosanoic (AR9) (5 mg). Nhóm phân đoạn ARH8.11 đƣợc phân tách lần lƣợt bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi n- hexan-EtOAc 9:1, và 6:1; sắc ký cột CC trên pha đảo RP-18 với hệ dung môi MeOH-H2O 7:3 cho hỗn hợp của achillin (AR8) và 1,10-epoxyachillin (AR14) (10 mg).
Nhóm phân đoạn ARH9 (1,9 g) đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 63-100 m) với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton 6:1, 3:1, và 1:1 cho 80 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20 ml. Các phân đoạn đƣợc gộp thành 5 nhóm phân đoạn, ký hiệu từ ARH9.1 - ARH9.5, trên cơ sở các phân tích sắc ký lớp mỏng. Các nhóm phân đoạn ARH9.3 và ARH9.5 đƣợc kết tinh trong hệ dung môi chạy cột cho lần lƣợt các hỗn hợp của 1-O-palmitoylglycerol (AR10) và 1-O-stearoylglycerol (AR11) (65 mg).