Phân tách phần chiết etyl axetat (ARE)

3.1 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY NGẢI RỪNG (ARTEMISIA ROXBURGHIANA BESS.)

3.1.4 Phân tách các phần chiết lá cây Ngải rừng

3.1.4.3 Phân tách phần chiết etyl axetat (ARE)

Phần chiết etyl axetat (ARE) (3 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC, kích thước cột 3  30 cm) trên silica gel Merck (cỡ hạt 63-200 m). Cột sắc ký được nhồi theo phương pháp nhồi ướt trong dung môi n-hexan và mẫu phân tách được đưa lên cột theo phương pháp tẩm mẫu trên silica gel. Sau khi mẫu đã đƣợc đƣa lên cột, cột đƣợc rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-EtOAc- HCOOH với các tỷ lệ 20:19:1, 20:20:1, và 20:10:1 (v:v:v) cho 82 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20 ml. Phân tích sắc ký lớp mỏng cho phép gộp các phân đoạn có sắc ký đồ giống nhau thành 5 nhóm phân đoạn, ký hiệu lần lƣợt từ ARE1 đến ARE5.

Nhóm phân đoạn ARE3 đƣợc phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel Merck (cỡ hạt 40-63 m) với hệ dung môi CH2Cl2-EtOAc 3:1 và 1:1 cho roxbughianin B (AR15) (5 mg).

Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat (ARE) đƣợc trình bày trong Sơ đồ 4.

Sơ đồ 4. Phân tách phần chiết etyl axetat (ARE)

3.1.5 Hằng số vật lý và dữ kiện phổ của các hợp chất phân lập đƣợc từ lá cây Ngải rừng

 Chất AR1 (3-Oxofriedelan)

Tinh thể dạng hạt màu trắng, đ.n.c. 262-265 °C.

Rf = 0,7 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 30:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ (ppm) 0,73 (3H, s, 24-CH3), 0,87 (3H, s, 25-CH3), 0,88 (3H, d, J = 7,0 Hz, 23-CH3), 0,95 (3H, s, 29-CH3), 1,0 (3H, s, 30-CH3), 1,01 (3H, s 26- CH3), 1,05 (3H, s 27-CH3), 1,18 (3H, s, 28-CH3), 2,24 (2H, m, H-2a, H-4), 2,38 (1H, ddd, J = 11,5 Hz, 7,0 Hz, 2,0 Hz, H-2b).

13C-NMR/DEPT (CDCl3): δ (ppm) 6,8 (q, C-23), 14,7 (q, C-24), 17,9 (q, C-25), 18,2 (t, C-7), 18,7 (q, C-27), 20,3 (q, C-26), 22,3 (t, C-1), 28,2 (s, C-20), 30,0, (s, C-17), 30,5 (t, C-12), 31,8 (q, C-30), 32,1 (q, C-28), 32,4 (t, C-21), 32,8 (t), 35,0 (q, C-29), 35,4 (t, C-19), 35,6 (t, C-11), 36,0 (t, C-16), 37,5 (s, C-9), 38,3 (s, C- 14), 39,3 (t, C-22), 39,7 (s, C-13), 41,3 (t, C-6), 41,5 (t, C-2), 42,2 (s, C-5), 42,8 (d, C-18), 53,1 (d, C-8), 58,2 (d, C-4), 59,5 (d, C-10), 213,2 (s, C-3).

Phần chiết etyl axetat (ARE) (3 g)

ARE1 ARE2 ARE3 ARE4 ARE5 CC, silica gel

n-hexan-EtOAc-HCOOH, gradient

20:19:1; 20:20:1, 10:20:1

ARE3.

1 ARE3.2 ARE3.

3

ARE3.4 ARE3.5 CC, silica gel

CH2Cl2- EtOAc 3:1, 1:1

ARE3.6 ARE3.7 ARE3.8

Rửa bằng axeton AR15 5 mg

 Chất AR2 (Friedelan-3β-ol)

Tinh thể dạng hạt màu trắng, đ.n.c. 287-289 °C.

Rf = 0,35 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 30:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ (ppm) 0,88 (3H, s, 25-CH3), 0,96 (3H, s, 30-CH3), 0,97 (3H, d, J = 7,0 Hz, 23-CH3), 0,98 (6H, s, 24-CH3, 26-CH3), 1,001 (3H, s, 27-CH3), 1,007 (3H, s, 29-CH3), 1,18 (3H, s, 28-CH3), 3,75 (1H, s br, H-3).

 Chất mới AR3 (Roxbughianin A)

Tinh thể hình kim không màu, đ.n.c. 145-146 oC.

[]24D = +172(c = 0,16, CHCl3).

Rf = 0,33 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 9:1, v:v).

IR (film) max (cm–1): 1764, 1650, 1436, 1374, 1221, 1176.

HR-ESI-TOF-MS (chế độ dương): m/z 249,1488, [M + H]+ (tính được cho C15H21O3: 249,1485).

1H-NMR (CDCl3):  1,14 (3H, d, J = 8,0 Hz, 13-CH3), 1,33 (3H, s, 14-CH3), 1,49 (2H, m, 2H-8), 1,82 (1H, m, H-7), 1,93 (3H, m, 15-CH3), 1,94 (1H, m, H-9a), 2,11 (1H, m, H-2a), 2,14 (1H, m, H-9b), 2,54 (1H, quintet, J = 8,0 Hz, H-11), 2,75 (1H, dd, J = 16,0 Hz, 1,5 Hz, H-2b), 2,82 (1H, d, J =10,5 Hz, H-5), 4,21 (1H, t, J = 10,5 Hz, H-6), 5,56 (1H, s br, H-3).

13C-NMR/DEPT (CDCl3):  10,1 (q, C-13), 18,2 (q, C-15), 20,4 (t, C-8), 22,7 (q, C-14), 33,5 (t, C-9), 39,6 (t, C-2), 39,6 (d, C-11), 49,9 (d, C-7), 52,8 (d, C-5), 62,5 (s, C-10), 72,4 (s, C-1), 82,1 (d, C-6), 124,7 (d, C-3), 140,8 (s, C-4), 180,0 (s, C- 12).

 Chất AR4 (Axit tetracosanoic) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,39 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 24-CH3), 1,26 (40H, s br, 4-CH2→ 23-CH2), 1,61 (2H, quintet, J = 7,5 Hz, 3-CH2), 2,29 (2H, t, J = 7,5 Hz, 2-CH2).

 Chất AR5 (β-Sitosterol) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,3 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 6:1, v:v).

IR (KBr) νmax (cm1): 3468, 1643, 1461, 1374, 1059.

 Hỗn hợp các chất AR6 và AR7 [Docosyl p-coumarat (AR6) và Tetracosyl p-coumarat (AR7)]

Bột vô định hình màu trắng.

[]23D = –2,6 (c = 0,1, pyridin).

Rf = 0,48 (TLC, silica gel, CH2Cl2-EtOAc 1:1, v:v).

IR (film) max (cm1): 3364, 2919, 2851, 1713, 1651, 1603, 1512, 1464, 1166, 1029.

ESI-TOF-MS (chế độ dương): m/z 353,5123 [([M  H]+  HOC6H4CH=CH2), C23H45O2+] và 381,3037 [([M  H]  HOC6H4CH=CH2), C25H49O2+].

1H-NMR (CDCl3): 0,88 (6H, t, J = 6,5 Hz, 22-CH3, 24-CH3), 1,26 (n  CH2, s br), 1,64 (2H, quintet, J = 7,0 Hz), 1,69 (2H, quintet, J = 7,0 Hz), 4,19 (2H, t, J = 7,5 Hz, 1-CH2), 6,29 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-8), 6,83 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H- 5), 7,43 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6), 7,61 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-7).

13C-NMR/DEPT (CDCl3): 14,1 (q, C-22, C-24″), 22,7 (t), 24,7 (t), 26,0 (t), 28,8 (t), 29,1 (t), 29,2 (t), 29,3 (t), 29,4 (t), 29,5 (t), 29,6 (t), 29,61 (t), 29,67 (t), 29,7 (t), 31,9 (t) (C-2 C-21, C-2" C-23"), 64,7 (t, C-1), 115,8 (d, C-8), 115,9 (d, C-3, C-5), 127,4 (s, C-1), 129,9 (d, C-2, C-6), 144,1 (d, C-7), 157,5 (s, C-4), 167,5 (s, C-9).

 Chất AR8 (Achillin)

Tinh thể hình kim màu trắng, đ.n.c. 145-146 °C.

Rf = 0,33 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 3:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 1,13 (3H, d, J = 8,0 Hz, 13-CH3), 2,29 (3H, s, 15-CH3), 2,43 (3H, s, 14-CH3), 2,46 (1H, m, H-7), 2,45 (1H, m, H-9b), 2,33 (1H, m, H-9a), 1,85 (1H, m, H-8b), 1,42 (1H, qd, J = 12,0 Hz, 1,0 Hz, H-8a), 2,7 (1H, quintet, J = 7,5 Hz, H-11), 3,41 (1H, d, J = 10,0 Hz, H-5), 3,81 (1H, t, J = 10,0 Hz, H-6), 6,16 (1H, s br, H-3).

13C-NMR/DEPT (CDCl3): δ 9,9 (q, C-13), 19,8 (q, C-15), 21,6 (q, C-14), 23,6 (t, C-8), 37,6 (t, C-9), 39,4 (d, C-11), 51,9 (d, C-7), 52,9 (d, C-5), 83,5 (d, C-6),

131,8 (s, C-1), 135,5 (d, C-3), 152,2 (s, C-10), 170,2 (s, C-4), 178,4 (s, C-12), 195,9 (s, C-2).

 Chất AR9 (Axit eicosanoic) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,39 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 6,5 Hz, 20-CH3), 1,25 (32H, s br, 4-CH2→ 19-CH2), 1,63 (2H, quintet, J = 7,0 Hz, 3-CH2), 2,35 (2H, t, J = 7,5 Hz, 2-CH2).

 Hỗn hợp các chất AR10 và AR11 [1-O-Palmitoylglycerol (AR10) và 1-O- Stearoylglycerol (AR11)]

Bột vô định hình màu trắng.

[]23D = –20,7 (c = 0,1, pyridin).

Rf = 0,48 (TLC, silica gel, CH2Cl2-EtOAc 1:1, v:v).

IR (film) max cm1: 3393, 2920, 2851, 1735, 1464, 1261, 1032.

TOF-ESI-MS (chế độ âm): m/z 255,1887 [([M (axit palmitic)  H]), C16H32O2] và 283,2553 [([M (axit stearic)  H]), C18H36O2].

1H-NMR (CDCl3): 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 16-CH3, 18-CH3), 1,29 (n  CH2, s br), 1,63 (2H, quintet, J = 7,0 Hz, 2H-3), 2,35 (2H, t, J = 7,0 Hz, 2H-2), 3,60 (1H, dd, J = 11,5 Hz, 5,5 Hz, H-3a), 3,69 (1H, dd, J = 11,5 Hz, 3,5 Hz, H-3b), 3,93 (1H, quintet, J = 4,5 Hz, H-2), 4,15 (1H, dd, J = 11,5 Hz, 6,0 Hz, H-1a), 4,20 (1H, dd, J = 11,5 Hz, 4,5 Hz, H-1b).

13C-NMR/DEPT (CDCl3): 14,1 (q, C-16, C-18), 22,7 (t), 24,9 (t), 29,1 (t), 29,3 (t), 29,4 (t), 29,5 (t), 29,6 (t), 29,66 (t), 29,7 (t), 31,9 (t) (C-3 C-15, C- 3 C-17), 34,2 (t, C-2), 63,4 (t, C-3), 65,2 (t, C-2), 70,3 (d, C-1), 174,3 (s, C- 1).

 Chất AR12 (Axit palmitic) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,39 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 16-CH3), 1,25 (24H, s br, 4-CH2→ 15-CH2), 1,60 (2H, quintet, J = 7,0 Hz, 3-CH2), 2,34 (2H, t, J = 7,5 Hz, 2-CH2).

 Chất AR13 (23(Z)-Cycloart-23-en-3,25-diol)

Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,40 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 3:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 0,32 (1H, d, J = 4,5 Hz, H-19a), 0,55 (1H, d, J = 4,5 Hz, H- 19b), 0,8 (3H, s, 28-CH3), 0,85 (3H, d, J = 6,5 Hz, 21-CH3), 0,88 (3H, s, 30-CH3), 0,96 (6H, s, 18-CH3, 29-CH3), 1,31 (6H, s, 26-CH3, 27-CH3), 3,38 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 4,5 Hz, H-3), 5,59 (2H, s br, H-23, H-24).

13C-NMR (CDCl3): δ 14,0 (q, C-29), 18,1 (q, C-18), 18,3 (q, C-21), 19,3 (q, C-28), 20,0 (s, C-9), 21,1 (t, C-6), 25,5 (q, C-30), 26,0 (s, C-10), 26,2 (t, C-7), 26,5 (t, C- 11), 28,1 (t, C-16), 29,9 (t, C-19), 29,91 (q, C-27), 29,99 (q, C-26), 30,4 (t, C-2), 31,9 (t, C-1), 32,8 (t, C-12), 35,6 (t, C-15), 36,4 (d, C-20), 39,1 (t, C-22), 40,5 (s, C-4), 45,5 (s, C-13), 47,1 (d, C-5), 47,9 (d, C-8), 48,9 (s, C-14), 52,0 (d, C-17), 70,8 (s, C-25), 78,9 (d, C-3), 125,6 (d, C-23), 139,4 (d, C-24).

 Chất AR14 (1β,10β-Epoxyachillin) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,30 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 9:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 1,16 (3H, d, J = 7,5 Hz, 13-CH3), 1,54 (1H, dddd, J = 13,5 Hz, 5,5 Hz, 3,0 Hz, 2,5 Hz, H-8a), 1,63 (1H, dddd, J = 13,5 Hz, 12,0 Hz, 12,0 Hz, 2,5 Hz, H-8b), 1,76 (3H, s, 14-CH3), 1,93 (1H, m, H-7), 2,03 (1H, ddd, J = 17,5 Hz, 12,5 Hz, 2,5 Hz, H-9a), 2,21 (1H, ddd, J = 15,5 Hz, 5,5 Hz, 2,5 Hz, H-9b), 2,37 (3H, s, 15-CH3), 2,61 (1H, quintet, J = 7,5 Hz, H-11), 3,04 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5), 4,25 (1H, t, J = 10,0 Hz, H-6), 6,2 (1H, s br, H-3).

13C-NMR (CDCl3): δ 9,91 (q, C-13), 20,9 (q, C-15), 18,9 (q, C-14), 19,8 (t, C-8), 34,6 (t, C-9), 39,3 (d, C-11), 51,8 (d, C-7), 47,9 (d, C-5), 79,7 (d, C-6), 66,9 (s, C- 1), 133,2 (d, C-3), 65,2 (s, C-10), 176,6 (s, C-4), 178,9 (s, C-12), 200,9 (s, C-2).

 Chất mới AR15 (Roxbughianin B) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,6 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc-HCOOH 10:20:1, v:v:v).

[]24D = +33,6(c = 0,11, CHCl3).

IR (film) max (cm–1): 3412, 3395, 1740, 1651, 1433, 1366, 1318, 1143, 1122, 1078.

HR-ESI-TOF-MS (chế độ dương): m/z 305,1361, [M + Na]+ (tính được cho C15H22O5Na: 305,1359).

1H-NMR (CD3OD):  1,20 (3H, d, J = 8,0 Hz, 13-CH3), 1,25 (3H, s, 14-CH3), 1,44 (3H, s, 15-CH3), 1,50 (1H, ddd, J = 14,5 Hz, 4,0 Hz, 3,5 Hz , H-9a), 1,68 (1H, m, H-8a), 1,73 (1H, m, H-8b), 2,17 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-5), 2,32 (1H, dddd, J = 14,5 Hz, 12,5 Hz, 5,5 Hz, H-9b), 2,64 (1H, quintet, J = 8,0 Hz, H-11), 2,80 (1H, m, H-7), 4,87 (1H, bị che khuất bởi tín hiệu dung môi, H-6), 5,80 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-2), 5,93 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-3).

13C-NMR/DEPT (CD3OD):  10,9 (q, C-13), 23,7 (t, C-8), 26,0 (q, C-15), 28,5 (q, C-14), 36,7 (t, C-9), 40,8 (d, C-11), 41,5 (d, C-7), 65,9 (d, C-5), 75,9 (s, C-10), 80,8 (s, C-4), 84,3 (d, C-6), 89,8 (s, C-1), 138,3 (d, C-2), 140,2 (d, C-3), 183,2 (s, C-12).

 Chất AR16 (1-Octacosanol) Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,50 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v:v).

1H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 28-CH3), 1,25 (50H, s br, 4- CH2→27-CH2)), 1,57 (4H, m, 2-CH2, 3-CH2), 1,57 (1H, m, -OH), 3,64 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-1).

 Chất mới AR17 (11-epi-8-Hydroxyarborescin) Bột vô định hình màu trắng.

[]24D = +215,5(c = 0,11, CHCl3).

Rf = 0,50 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 2:1, v:v).

IR (film) max (cm1): 3454, 1759, 1441, 1381, 1261, 1222, 1181.

HR-ESI-TOF-MS (chế độ dương): m/z 287,1255, [M + Na]+ (tính được cho C15H20O4Na: 287,1253).

1H-NMR (CDCl3):  1,28 (3H, d, J = 7,5 Hz, 13-CH3), 1,35 (3H, s, 14-CH3), 1,93 (3H, s br, 15-CH3), 1,99 (1H, ddd, J = 10,5 Hz, 10,5 Hz, 7,0 Hz, H-7), 2,12 (1H, d, J = 18,0 Hz, H-2), 2,16 (1H, dd, J = 14,5 Hz, 10,5 Hz, H-9), 2,33 (1H, dd, J

= 14,5 Hz, 3,5 Hz, H-9), 2,76 (2H, m, H-2, H-11), 2,86 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-

5), 3,86 (1H, ddd, J = 10,5 Hz, 10,5 Hz, 3,5 Hz, H-8), 4,29 (1H, t, J = 10,5 Hz, H- 6), 5,56 (1H, s br, H-3).

13C-NMR/DEPT (CDCl3):  9,7 (q, C-13), 18,2 (q, C-15), 22,7 (q, C-14), 38,2 (d, C-11), 39,3 (t, C-2), 43,5 (t, C-9), 51,6 (d, C-5), 56,2 (d, C-7), 60,6 (s, C-10), 64,6 (d, C-8), 72,3 (s, C-1), 79,0 (d, C-6), 124,8 (d, C-3), 140,6 (s, C-4), 179,6 (s, C-12).

 Hỗn hợp các chất AR18 và AR19 [24(R)-Cycloart-25-en-3,24-diol (AR18) và 24(S)-Cycloart-25-en-3,24-diol (AR19)]

Bột vô định hình màu trắng.

Rf = 0,4 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 3:1).

1H-NMR (CDCl3) (AR18): δ (ppm) 0,33 (1H, d, J = 4,0 Hz, H-19a), 0,55 (1H, d, J = 4,0 Hz, H-19b), 0,81 (3H, s, 28-CH3), 0,88 (3H, d, J = 6,0 Hz, 21-CH3), 0,89 (3H, s, 30-CH3), 0,96 và 0,97 (6H, s, 18-CH3, 29-CH3), 1,73 (3H, s, 27-CH3), 3,28 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 4,5 Hz, H-3), 4,02 (1H, dd, J = 7,5 Hz, 6,0 Hz, H-24), 4,84 (1H, s, H-26a), 4,92 (1H, s, H-26b).

13C-NMR/DEPT (CDCl3) (AR18):  (ppm) 14,0 (q, C-29), 17,6 (q, C-27), 18,0 (q, C-18), 18,3 (q, C-21), 19,3 (q, C-28), 20,0 (s, C-9), 21,1 (t, C-6), 25,4 (q, C- 30), 26,0 (s, C-10), 26,1 (t, C-7), 26,5 (t, C-11), 28,0 (t, C-16), 29,9 (t, C-19), 30,4 (t, C-2), 31,5 (t, C-23), 31,9 (t, C-1), 31,97 (t, C-22), 32,9 (t, C-12), 35,6 (t, C-15), 35,9 (d, C-20), 40,5 (s, C-4), 45,3 (s, C-13), 47,1 (d, C-5), 47,9 (d, C-8), 48,8 (s, C-14), 52,2 (d, C-17), 76,4 (d, C-24), 78,8 (d, C-3), 111,4 (t, C-26), 147,8 (s, C- 25).

1H-NMR (CDCl3) (AR19): δ (ppm) 0,33 (1H, d, J = 4,0 Hz, H-19a), 0,55 (1H, d, J = 4,0 Hz, H-19b), 0,81 (3H, s, 28-CH3), 0,88 (3H, d, J = 6,0 Hz, 21-CH3), 0,89 (3H, s, 30-CH3), 0,96 và 0,97 (6H, s, 18-CH3, 29-CH3), 1,73 (3H, s, 27-CH3), 3,28 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 4,5 Hz, H-3), 4,02 (1H, dd, J = 7,5 Hz, 6,0 Hz, H-24), 4,84 (1H, s, H-26a), 4,93 (1H, s, H-26b).

13C-NMR/DEPT (CDCl3) (AR19):  (ppm) 14,0 (q, C-29), 17,2 (q, C-27), 18,2 (q, C-18), 18,3 (q, C-21), 19,3 (q, C-28), 20,0 (s, C-9), 21,1 (t, C-6), 25,4 (q, C- 30), 26,0 (s, C-10), 26,1 (t, C-7), 26,5 (t, C-11), 28,1 (t, C-16), 29,9 (t, C-19), 30,4

(t, C-2), 31,7 (t, C-23), 31,9 (t, C-1), 31,97 (t, C-22), 32,9 (t, C-12), 35,6 (t, C-15), 35,96 (d, C-20), 40,5 (s, C-4), 45,3 (s, C-13), 47,1 (d, C-5), 47,9 (d, C-8), 48,8 (s, C-14), 52,2 (d, C-17), 76,7 (d, C-24), 78,8 (d, C-3), 110,9 (t, C-26), 147,5 (s, C- 25).

3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY THANH CAO BẮC BỘ (ARTEMISIA DUBIA WALL. EX BESS. VAR. LONGERACEMOSA PAMP.