4.3 Nội dung 3: Đánh giá khả năng chọn tạo các dòng đậu nành chống chịu mặn bằng phương pháp tạo biến dị soma và chiếu xạ tia gamma
4.3.4 Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng của chiếu xạ tia gamma Co 60 và muối NaCl lên sự tạo chồi và sinh trưởng của chồi từ trục phôi đậu nành MTĐ 760-4
4.3.4.1 Thí nghiệm 9a: Ảnh hưởng của chiếu xạ tia gamma Co 60 và muối NaCl lên sự tạo chồivà sinh trưởng của chồitrong lần chọn lọc 1
a) Tỉ lệ sống
Kết quả Bảng 4.37 cho thấy, các nồng độ muối NaCl xử lý có ảnh hưởng đến tỉ lệ sống của trục phôi đậu nành ở các thời điểm 2, 4 và 6 tuần SKC. Ở 4 và 6 tuần SKC, nồng độ muối càng cao thì tỉ lệ sống của trục phôi càng giảm.
Tỉ lệ sống thấp nhất là ở 2 nồng độ NaCl 7,5 và 10 g L, chỉ từ 40,6-51,6%, khác biệt có ý nghĩa so với nồng độ NaCl 5 g L (71,9%) và đối chứng NaCl 0 g L (92,2%). Các liều chiếu xạ từ 0-60 Gy không có ảnh hưởng đến tỉ lệ sống của trục phôi qua các thời điểm theo dõi.
Bảng 4.37: Tỉ lệ sống của trục phôi (%) ảnh hưởng bởi chiếu xạ tia gamma Co60 và muối NaCl ở 2, 4 và 6 tuần SKC trong lần chọn lọc 1
Liều chiếu xạ và nồng độ NaCl (g/L) Tuần sau khi cấy
2 4 6
0 Gy + NaCl 0 100a 100a 100a
20 Gy + NaCl 0 100a 87,5abc 87,5ab
40 Gy + NaCl 0 100a 81,3abcd 81,3ab
60 Gy + NaCl 0 100a 100a 100a
0 Gy + NaCl 5 100a 87,5abc 87,5ab
20 Gy + NaCl 5 81,3bc 81,3abcd 75,0abc
40 Gy + NaCl 5 93,8ab 87,5abc 56,3bcd
60 Gy + NaCl 5 93,8ab 75,0abcde 68,8abc
0 Gy + NaCl 7,5 43,8d 25,0f 25,0cd
20 Gy + NaCl 7,5 93,8ab 93,8ab 93,8ab
40 Gy + NaCl 7,5 56,3cd 37,5ef 31,3cd
60 Gy + NaCl 7,5 37,5d 25,0f 12,5d
0 Gy + NaCl 10 87,5ab 50,0def 31,3cd
20 Gy + NaCl 10 87,5ab 50,0cdef 50,0abcd
40 Gy NaCl 10 93,8ab 62,5bcdef 62,5abc
60 Gy + NaCl 10 81,3bc 62,5bcdef 62,5bcd
Trung bình (Liều chiếu xạ)
0 Gy 82,8 65,6 60,9
20 Gy 90,6 78,1 76,6
40 Gy 85,9 67,2 57,8
60 Gy 78,1 65,6 60,9
Trung bình (Nồng độ NaCl)
NaCl 0 100a 92,2a 92,2a
NaCl 5 92,2b 82,8a 71,9b
NaCl 7,5 57,8c 45,3b 40,6c
NaCl 10 87,5b 56,3b 51,6c
Fliều chiếu xạ ns ns ns
FNaCl ** ** **
Fliều chiếu xạx NaCl ** ** **
CV (%) 19,1 36,8 42,9
Số liệu được chuyển sang dạng Arcsin√x trước khi phân tích thống kê. Trong cùng một cột, những số có chữ theo sau giống nhau khác biệt không có ý nghĩa thống kê khi dùng phép kiểm định Duncan;
(ns): khác biệt không có ý nghĩa thống kê; (**): khác biệt ở mức 1%.
Tuy nhiên có ảnh hưởng tương tác giữa liều chiếu xạ và nồng độ NaCl lên tỉ lệ sống của trục phôi. Ở 2 tuần SKC, mẫu trục phôi không xử lý mặn sống 100% ở tất cả các liều chiếu xạ và mẫu trục phôi xử lý mặn 5 g L nhƣng không chiếu xạ cũng sống 100%, tỉ lệ sống thấp nhất hầu nhƣ ở nồng độ NaCl 7,5 g L. Ở 4 tuần SKC, tỉ lệ mẫu sống cao ở các nghiệm thức không xử lý mặn và xử lý NaCl 5 g L (đạt từ 75,0-100%) và giảm thấp nhất ở các nghiệm thức có nồng độ NaCl tăng cao từ 7,5-10 g/L (25,0-62,5%), ngoại trừ mẫu ở liều chiếu xạ 20 Gy kết hợp chọn lọc mặn ở nồng độ 7,5 g L. Đến 6 tuần SKC, kết
quả cũng tương tự, khi nồng độ mặn cao, mẫu có khuynh hướng giảm tỉ lệ sống. Tỉ lệ sống thấp nhất ở nghiệm thức muối NaCl 5 g L + liều 40 Gy, NaCl 7,5 g L + liều 0, 40 và 60 Gy, NaCl 10 g L + liều 0, 20 và 60 Gy.
b) Tỉ lệ tạo chồi
Mẫu có sự hình thành chồi ở 2 tuần SKC, tuy nhiên tỉ lệ rất thấp. Đến 4 và 6 tuần SKC, tỉ lệ tạo chồi có sự gia tăng và khác biệt rõ ở các nghiệm thức.
Tỉ lệ tạo chồi giảm khi tăng nồng độ muối NaCl. Nồng độ NaCl tăng từ 5-10 g/L có tỉ lệ tạo chồi thấp nhất và khác biệt có ý nghĩa so với nồng độ NaCl 0 g/L ở thời điểm 4 và 6 tuần SKC. Cụ thể, đến 6 tuần SKC, tỉ lệ tạo chồi thấp nhất (3,1%) ở nồng độ NaCl cao nhất là 10 g/L, không khác biệt so với nồng độ 7,5 g/L (9,4%), nhưng có khác biệt so với NaCl 5 và 0 g/L (tương ứng là 12,5 và 31,3%).
Ở 4 và 6 tuần SKC, liều chiếu xạ 20 và 40 Gy có tỉ lệ tạo chồi (từ 10,9- 14,1% ở 4 tuần và từ 12,5-18,8% ở 6 tuần) không khác biệt so với liều 0 Gy (21,9 ở 2 tuần và 25,0% ở 6 tuần) nhƣng có khác biệt với liều 60 Gy (tạo chồi 0%). Kết quả cho thấy liều 60 Gy gây tổn thương mẫu cấy nhiều nhất, mẫu hoàn toàn không tạo chồi.
Có ảnh hưởng tương tác giữa liều chiếu xạ và nồng độ NaCl lên tỉ lệ tạo chồi của mẫu cấy. Ở 4 tuần SKC, tỉ lệ tạo chồi cao nhất ở liều 0 Gy + NaCl 0 g/L (68,8%), thấp nhất là ở liều 60 Gy khi xử lý với NaCl từ 0-10 g/L, liều 0 và 20 Gy + NaCl 10 g/L, 0 Gy + NaCl 7,5 g/L và 40 Gy + NaCl 5 g/L (không tạo chồi). Đến 6 tuần SKC, liều 0, 20 và 40 Gy + NaCl 0 g/L cho tỉ lệ tạo chồi cao nhất cùng với nghiệm thức 0 Gy + NaCl 5 g/L, 20 Gy + NaCl 5 g/L và 20 Gy + NaCl 7,5 g/L (Bảng 4.38).
Bảng 4.38: Tỉ lệ tạo chồi (%) ảnh hưởng bởi chiếu xạ tia gamma Co60 và muối NaCl ở 4 và 6 tuần SKC trong lần chọn lọc 1
Liều chiếu xạ và nồng độ NaCl (g/L) Tuần sau khi cấy
4 6
0 Gy + NaCl 0 68,8a 68,8a
20 Gy + NaCl 0 25,0b 31,3b
40 Gy + NaCl 0 18,8b 25,0bc
60 Gy + NaCl 0 0,0c 0,0d
0 Gy + NaCl 5 18,8b 31,3bc
20 Gy + NaCl 5 18,8b 18,8bcd
40 Gy + NaCl 5 0,0c 0,0d
60 Gy + NaCl 5 0,0c 0,0d
0 Gy + NaCl 7,5 0,0c 0,0d
20 Gy + NaCl 7,5 12,5bc 25,0bc
40 Gy + NaCl 7,5 12,5bc 12,5cd
60 Gy + NaCl 7,5 0,0c 0,0d
0 Gy + NaCl 10 0,0c 0,0d
20 Gy + NaCl 10 0,0c 0,0d
40 Gy NaCl 10 12,5bc 12,5cd
60 Gy + NaCl 10 0,0c 0,0d
Trung bình (Liều chiếu xạ)
0 Gy 21,9a 25,0a
20 Gy 14,1a 18,8a
40 Gy 10,9a 12,5a
60 Gy 0,0b 0,0b
Trung bình (Nồng độ NaCl)
NaCl 0 28,1a 31,3a
NaCl 5 9,4b 12,5b
NaCl 7,5 6,3b 9,4bc
NaCl 10 3,1b 3,1c
Fliều chiếu xạ ** **
FNaCl ** **
Fliều chiếu xạx NaCl ** **
CV (%) 89,3 79,7
Số liệu được chuyển sang dạng Arcsin√x trước khi phân tích thống kê. Trong cùng một cột, những số có chữ theo sau giống nhau khác biệt không có ý nghĩa thống kê khi dùng phép kiểm định Duncan;
(**): khác biệt ở mức 1%.
c) Chiều cao chồi
Bảng 4.39 cho thấy chiều cao chồi cũng bị ảnh hưởng bởi nồng độ NaCl và liều chiếu xạ. Nồng độ NaCl và liều chiếu xạ tăng làm giảm chiều cao của chồi. Cụ thể, ở 4 tuần SKC, nồng độ NaCl 7,5 và 10 g L cho chiều cao chồi thấp nhất (khoảng 0,2 cm), khác biệt có ý nghĩa so với liều 5 và 0 g L (khoảng 0,3-0,4 cm). Liều chiếu xạ từ 20 Gy đã có ảnh hưởng đến chiều cao chồi, kết quả có sự khác biệt so với liều 0 Gy (0,22 cm so với 0,64 cm). Ở 6 tuần SKC, chiều cao chồi có sự gia tăng nhƣng không nhiều. Mặc dù vậy vẫn thấy rõ sự
khác biệt về chiều cao chồi ở các liều chiếu xạ so với liều đối chứng, cũng nhƣ nồng độ NaCl xử lý so với nồng độ đối chứng. Chồi chiếu xạ từ 20 Gy có chiều cao chồi giảm thấp nhất còn 0,35 cm so với đối chứng 1,58 cm. Nồng độ NaCl từ 5-10 g L có chiều cao chồi từ 0,3-0,45 cm so với đối chứng là 1,19 cm.
Có ảnh hưởng tương tác giữa liều chiếu xạ và nồng độ muối NaCl xử lý lên chiều cao chồi ở 4 và 6 tuần SKC. Chiều cao chồi cao nhất là ở liều 0 Gy + NaCl 0 g/L, thấp nhất là ở liều 20 Gy + NaCl 0 g/L, 20 Gy + NaCl 5 g/L, 20 Gy + NaCl 7,5 g/L, 40 Gy + NaCl 7,5 g/L, 40 Gy + NaCl 10 g/L.
Kết quả cho thấy, trong phương pháp chiếu xạ tia gamma Co60 liều 0, 20, 40 và 60 Gy kết hợp với xử lý NaCl 0; 5; 7,5 và 10 g/L, mẫu trục phôi đậu nành có sự giảm tỉ lệ sống, tỉ lệ tạo chồi và chiều cao chồi thấp do ảnh hưởng của sự chiếu xạ và xử lý mặn. Ở liều chiếu xạ 60 Gy, mẫu không có sự tạo chồi. Các mẫu chồi có tiềm năng chống chịu mặn thu đƣợc sau chọn lọc trong thí nghiệm là ở liều 0 Gy + NaCl 5 g/L, liều 20 Gy + NaCl 5 g/L, liều 20 Gy + NaCl 7,5 g/L, liều 40 Gy + NaCl 5 g/L, liều 40 Gy + NaCl 7,5 g/L nhƣng với số lƣợng rất ít (Hình 4.15). Những mẫu chồi này tiếp tục đƣợc cấy chuyền trên môi trường có cùng nồng độ muối để chọn lọc lần thứ 2.
Hình 4.15: Ảnh hưởng của chiếu xạ tia gamma Co60 và NaCl lên sự tạo chồi đậu nành MTĐ 760-4 trong lần chọn lọc 1
0 Gy + NaCl 5 g/L (a) 20 Gy + NaCl 5 g/L (b) 20 Gy + NaCl 7,5 g/L (c) 60 Gy + NaCl 5 g/L (d)
Bảng 4.39: Chiều cao chồi (cm) ảnh hưởng bởi chiếu xạ tia gamma Co60 và muối NaCl ở 4 và 6 tuần SKC trong lần chọn lọc 1
Liều chiếu xạ và nồng độ NaCl (g/L) Tuần sau khi cấy
4 6
0 Gy + NaCl 0 0,78a 2,55a
20 Gy + NaCl 0 0,20d 0,29d
40 Gy + NaCl 0 0,30c 0,75b
60 Gy + NaCl 0 - -
0 Gy + NaCl 5 0,50b 0,62bc
20 Gy + NaCl 5 0,20d 0,28d
40 Gy + NaCl 5 - -
60 Gy + NaCl 5 - -
0 Gy + NaCl 7,5 - -
20 Gy + NaCl 7,5 0,25cd 0,45bcd
40 Gy + NaCl 7,5 0,30c 0,30cd
60 Gy + NaCl 7,5 - -
0 Gy + NaCl 10 - -
20 Gy + NaCl 10 - -
40 Gy NaCl 10 0,20d 0,30cd
60 Gy + NaCl 10 - -
Trung bình (Liều chiếu xạ)
0 Gy 0,64a 1,58a
20 Gy 0,22b 0,34c
40 Gy 0,23b 0,45b
60 Gy - -
Trung bình (Nồng độ NaCl)
NaCl 0 0,43a 1,19a
NaCl 5 0,35a 0,45b
NaCl 7,5 0,23b 0,38b
NaCl 10 0,20b 0,30b
Fliều chiếu xạ ** **
FNaCl ** **
Fliều chiếu xạx NaCl ** **
CV (%) 13,6 23,3
Trong cùng một cột, những số có chữ theo sau giống nhau khác biệt không có ý nghĩa thống kê khi dùng phép kiểm định Duncan; (**): khác biệt ở mức 1%.