L ời cảm ơn
3.4.1. Kết quả phõn tớch sự đa hỡnh protein ở lỏc ủa một số giống đậu
tương bằng kỹ thuật điện di SDS-PAGE
Mẫu lỏ của cỏc giống đậu tương nhiễm và khỏng bệnh gỉ sắt như DT12, VMK, CBU8325, DT2000 được tỏch chiết, hũa trong dung dịch đệm 0,1M Tris-HCl và điện di trờn gel polyacrylamide 12,5%. Kết quả phõn tớch điện
di cho thấy ở cỏc giếng nhiều băng vạch xuất hiện và phõn bố từ giải khối 10 kDa đến 200 kDa. Cỏc băng điện di phõn tỏch tốt, đặc biệt là vựng cú khối lượng thấp (<25 kDa). Giữa cỏc giống DT12, VMK, CBU8325, DT2000 cú
sự tương đồng về thành phần protein, mức độ phõn bố và độ đậm nhạt của cỏc băng. Điều này chứng tỏ phương phỏp tỏch chiết protein là ổn định và thớch hợp cho việc nghiờn cứu protein từ lỏ đậu tương (hỡnh 3.7).
Trờn cỏc đường chạy điện di đều thấy xuất hiện cỏc băng protein cú hàm lượng lớn, nhỏ điển hỡnh cho hỡnh ảnh điện di protein bằng phương
phỏp SDS-PAGE. Trong lỏ, cỏc protein như rubisco hoặc cỏc protein tham
gia hệ thống quang húa chiếm đa số. Nếu cú thể loại bỏ, hoặc giảm bớt
nồng độ cỏc protein cú hàm lượng lớn này sẽ tạo điều kiện cho phõn tỏch
cỏc protein nhỏ khỏc bằng điện di tốt hơn như nghiờn cứu của Krishnan và cộng sự (2009) [68]. Bằng việc tỏch chiết trong đệm thớch hợp chứa 10 mM
Ca2+ và 10 mM phytate, cỏc tỏc giả đó loại bỏ được cỏc thành phần protein lớn như Rubisco tạo thuận lợi cho quỏ trỡnh nghiờn cứu protein bằng điện di 1 chiều (SDS-PAGE) và điện di 2 chiều (2-DE).
Hỡnh3.7. Hỡnh ảnh điện di SDS-PAGE 12,5% của protein chiết từ lỏ đậu
tương VMK,CBU8325, DT12 và DT2000
Mặt khỏc, quan sỏt điện di SDS-PAGE của mẫu thớ nghiệm với đối
chứng hoặc giữa cỏc mẫu với nhau, chỳng tụi nhận thấy cú sự biểu hiện khỏc
nhau (mức độ đậm nhạt của cỏc vạch điện di protein tương ứng) là khụng
đỏng kể. Do đú, để so sỏnh mức độ biểu hiện khỏc nhau của cỏc protein, cũng
nhưng sự biến đổi cỏc thành phần và dạng tương đồng (isoform) của chỳng thỡ việc sử dụng phương phỏp điện di 2-DE là thớch hợp hơn.