Alcaligenes
4.4.2.4.Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của VSV( Bacillus)
+ Xác định tốc độ sinh trưởng bằng chỉ số mật độ quang-OD 620 nm
Để đánh giá tốc độ phát triển của vi khuẩn trên mơi trường ni cấy, có thể đo sự tăng sinh khối thông qua giá trị OD .Với vi khuẩn sử dụng bước sóng 620nm.
+ Phương pháp xác định đơn vị khuẩn lạc:
Dùng micropipette vô trùng hút 0.1ml dịch ni cấy cho vào ống effpendos chứa 900µl nước cất thanh trùng và đảo trộn đều. Tiếp tục làm như vậy để thu được độ pha lỗng thích hợp. Mơi trường NB được bổ sung agar 1.8%, khử trùng ở 1atm trong 20 phút. Khi mặt thạch khô, cấy và gạt đều dịch pha loãng. Mỗi độ pha loãng lặp lại 3 lần. Các hộp peptri gói kín để trong tủ ấm 30-35ºC trong 24h, đếm số khuẩn lạc tạo thành.
Kết quả: số lượng tế bào vi khuẩn trong 1ml dịch ni cấy được tính theo cơng thức:
CFU= (số khuẩn lạc trung bình x độ pha lỗng)/ lượng dịch trong hộp + Phương pháp nhuộm gram:
Sử dụng tế bào vi khuẩn được nuôi trong 24h để làm tiêu bản. Làm vết bơi trên phiến kính, để khơ, cố định vết bơi trên ngọn lửa đèn cồn. Nhuộm vết bơi bằng tím gential trong 1-2 phút, đổ thuốc nhuộm đi, xử lý tiêu bản bằng dung dịch lugol trong 1-2 phút. Đổ lugol và rửa bằng cồn 96 ºC trong 1-2 phút. Rửa
Tiểu luận cơng nghệ sản xuất phân bón TS.Nguyễn Liêu Ba
1-2 phút, rửa sạch bằng nước cất. Để tiêu bản khơ và đem quan sát bằng vật kính 1000. Vi khuẩn Gram+ bắt màu lam tím, vi khuẩn Gram- bắt màu đỏ.
+ Xác định đặc điểm khuẩn lạc: quan sát đặc điểm khuẩn lạc Bacillus trên bằng cách cấy các vi khuẩn trên môi trường NB, nuôi trong tủ ấm 30-35ºCs trong 24h-48h. Chọn những hộp lồng có khuẩn lạc mọc riêng rẽ để quan sát.
+Xác định hình thái tế bào, bào tử: có thể sử dụng mơi trường lỏng hay thạch để quan sát đặc điểm hình thái tế bào, bào tử. Vi khuẩn sau khi được ni cấy trên mơi trường thích hợp, làm tiêu bản nhuộm Gram. Quan sát tế bào, cách sắp xếp, bào tử trên kính hiển vi quang học có độ phóng đại 1000 lần.