Alcaligenes
4.4.2.2.Phương pháp giữ giống và cấy chuyển:
Sau khi phân lập được các chủng VSV( như: B. megaterium, B. subtilis, Pseudomonas, Azospirillum, Rhirobium) cần tiến hành giữ giống, theo 3 cách:
Cách 1: Giữ trong ống thạch nghiêng: các giống VSV được bảo quản trong tủ lạnh ở 4ºC, thời gian tốt nhất là 1 tháng.
Cách 2: Giữ trên môi trường glyxerol .
Ta tiến hành chuẩn bị môi trường lỏng NB cho vào bình tam giác 100ml hoặc 250ml và cấy chủng tương ứng vào. Bình được nuôi trên máy lắc 120 vòng/phút, nhiệt độ nuôi 30-35ºC trong vòng 32-36h. Sau đó lấy 0.7-0.8ml dịch nuôi cấy cho vào ống effpendos và hút 0.2-0.3 ml glyxerol cho vào và đậy nắp, lắc thật kĩ để trở thành dạng huyền phù, sau đó để ngăn đá. Mẫu có thể giữ được 6 tháng.
Cách 3: Ta tiến hành chuẩn bị môi trường NB tương ứng không có agar cho vào bình tam giác 100ml hoặc 250ml và cấy chủng tương ứng vào. Bình được nuôi cấy trên máy lắc 120 vòng/ phút. Nhiệt độ nuôi cấy 30-35ºC trong vòng 32-36h. Sau đó lấy 1ml dịch nuôi cấy đem ly tâm với vận tốc 5000 vòng/ phút. Sau đó bỏ dịch nổi thu sinh khối. Thêm 500µl dung dịch giữ giống
Môi trường NB:
Thành phần Khối lượng(g/l)
Cao thịt 3
Pepton 5
MgSO4.7H2O 0.2
4.4.2.3. Phương pháp thử tính đối kháng của các chủng VSV (Bacillus):
Trong quá trình phân lập và tuyển chọn các chủng VSV ta có thể chọn được một hay nhiều chủng. Khi tạo chế phẩm các chủng này phải được kiểm tra xem chúng có ức chế kìm hãm lẫn nhau không. Cho nên việc xác định khả năng đối kháng là cần thiết. Để xác định khả năng đối kháng ta tiến hành như sau: Chuẩn bị môi trường thạch Pikovskaya, thanh trùng ở 121ºC trong 20 phút sau đó đổ vào hộp peptri. Cấy các chủng đã được chọn vào hộp peptri này bằng cách dung que cấy cấy thành những đường dài thẳng hàng (mỗi đường 3-4cm). Các chủng được cấy xen kẽ nhau sao cho một chủng nằm giữa 2 chủng. Nuôi trong tủ ấm 30-35ºC sau 36-48h lấy ra kiểm tra. Nếu các đường thẳng cấy khuẩn lạc đề mọc khuẩn lạc hoặc mọc chùm lên nhau thì chứng tỏ những chủng đó không có tính đối kháng và chúng có thể cho vào cùng chế phẩm còn nếu khuẩn lạc chỉ mọc trên đường thẳng này mà không mọc trên đường thẳng khác thì chứng tỏ chúng kìm hãm lẫn nhau. Trong trường hợp này không thể cho chúng vào cùng một chế phẩm.