Hình 4.3 cho thấy một quy trình chiết tâch hỗn hợp saponin thơ (steroidal hoặc triterpene glycoside). Mẩu ngun liệu thực vật được loại câc chất bĩo bằng dung môi n-hexane vă chiết bằng MeOH. Dịch chiết MeOH được cô trong điều kiện chđn khơng, sau đó hịa tan lại bang nước cất deion vă tiến hănh chiết phđn đoạn với dung mơi n-butanol. Diethyl ether được thím văo phđn đoạn butanol đế thu được phđn kít tủa, lọc kít tủa chính lă phần saponin thơ.
Chiết tâch chọn lọc vă phđn đoạn câc sterol thực vật (bao gôm sapogenin, bufadienolide vă glycoside) cũng được tiến hănh tương tự thông qua việc sử dụng câc phương phâp hóa học vă dung mơi. Câc hợp chất khơng chứa nhóm alcohol có thể được tâch ra từ câc alcohol bằng
phthalate, câc alcohol có thể được tâi tạo lại bằng câch xử lý với natri methoxide trong MeOH. Câc sterol có chứa nhóm ketone có the được tâch ra khỏi câc phđn đoạn không chứa ketone bằng câch chiết chúng thông qua câc dung môi hữu cơ vă dung dịch Girard (H2N.NH.CO.CH2.NR3 +C1") vă câc ketone có- the được tâi tạo bang thủy phđn acid.
Câc alkaloid có chứa câc amin bậc nhất có thí đưọ'c trích chọn lọc băng câch sử dụng quy trình thay đồi so với với phương phâp co dien "acid-base shakeout" (hình 4.4). cần loại bở câc acid vơ cơ vă câc base mạnh trong quâ trình chiết tâch alkaloid (vă ngun liệu thực vật nói chung) do nguy CO’ tạo ra artifact. Câc quy trình chiết tâch alkaloid sử dụng acid tartaric vă Na2CƠ3 để điều chinh độ pH trong q trình chiết tâch. Đầu tiín, pH được điều chính đến giâ trị pKa < 2 của câc amin bậc nhất khiến chúng dễ dăng hình thănh câc dạng muối vă do đó dễ dăng bị phđn bố văo nước (cùng với câc thănh phần phđn cực, bao gồm amin bậc bốn vă alkaloid ỳV-oxide). Câc họp chất không phđn cực sẽ bị giữ lại trong pha dung môi hữu cơ. Sau khi loại bở lớp dung môi hữu cơ, dịch nước thu được tiếp tục tiến hănh tạo câc ra dạng base tự do của alkaloid bậc nhất. Tiếp tục cho dung môi hữu cơ mới văo dịch nước, câc alkaloid phđn bố văo lóp dung mơi hữu cơ, tạo ra một phần alkaloid gần như tinh khiết, ngoại trù' câc A^-oxide vă câc amin bậc bốn vẫn còn trong dịch nước. Sơ đồ chiết tâch cũng có thí thay đơi bằng câch sử dụng một loạt câc bước phđn tâch với sự tăng dần tính acid tạo nín một gradient pH nhằm chiết tâch câc họp chất trung tính (hoặc có tính acid trung bình) thănh câc alkaloid. Câc alkaloid cũng có thể được chiết tâch bằng dung dịch acid acetic 10% trong EtOH, sau đó được cô trong điều kiện chđn không tới một phần tư thế tích ban đầu vă lượng kết tủa của phần alkaloid thơ được thím dung dịch NH4OH. Ngoăi ra, ngun liệu thực vật trước tiín cũng có thể được ngđm với một base pha loêng (NaHCƠ3, Na2CƠ3, hoặc dung dịch CaCCh), sau đó lă ngđm dầm hoặc ngấm kiệt với dung môi hữu cơ không phđn cực.
Mau thực vật
1. Loại bĩo bang Hexane hoặc petroleum ether
2. Chiết với MeOH. lọc: co
Dịch chiết MeOH
loại bẽo
1. Trộn với axit tartaric pH=5
2. Cliiít phđn đoạn với EtOAc
Pha dung dịch acid Phản đoạn Ethyl acetate
1. Tạo Alkaline với dung
dịch Na.? po 3 pH =11
2. Chiẻt phân đoạn với EtOAc
Dịch nước Phđn đoạn Ethyl acetate (chửa amine bậc 4, , . ____ • 1 1 1 11
17 1.1 7- .; (chưa amin bạc 1,2,3) alkaloid N-oxides