Thành phần Khối lượng trong synbiotic (g/3g) SK riêng CFU/g Mật độ trong synbiotic CFU/g TH
tối ưu TH 12 TH 3 TH 11 TH tối ưu TH 12 TH 3 TH 11 Bột sấy ĐS 1,746 1,543 1,35 1,254 - - - - L. acidophillus 0,10 0.66 0,268 0,166 5x1010 2,6 x1011 15,5x1010 9 x1010 8 x107 L. plantarum 0,614 0,385 1,00 0,522 2 x1011 5,6 x1011 8 x1011 2,81x1011 4 x1011 B. longum 0,10 0,1 0,275 0,1 8 x1010 8,8 x1010 9 x1010 6 x1010 7,5x109 B. lactiCs 0,440 0,31 0,1 0,956 1011 4.1 x1011 3.9 x1011 1,1 x1011 109
Sự biến động mật độ trong synbiotic sau 24 ÷ 48h ni cấy (Số lần tăng hoặc giảm)
L. acidophillus ↑5,2 ↑5,1 ↑1,8 K tăng
L. plantarum ↑2,8 ↑4 1,4 ↑2
B. longum ↑1,1 ↑1,1 K tăng K tăng
B. lactiCs ↑4,1 ↑3,9 ↑1,1 K tăng
Ghi chú: ↑= tăng;K tăng = không tăng
Như vậy, ở tổ hợp tối ưu và tổ hợp 12 (TH 12), các chủng vi khuẩn đều gia tăng mật độ trong khi các tổ hợp cịn lại vi khuẩn phát triển khơng đều. Cả hai tổ hợp tối ưu và tổ hợp 12 đều đạt yêu cầu về mật độ vi khuẩn. Tuy nhiên hàm lượng bột inulin củ đẳng sâm bổ sung ở tổ hợp 12 cần ít hơn. Vì vậy hàm lượng bột inulin củ đảng sâm 0,514 g được phối trộn với sinh khối L. acidophillus 0,22 g (SK riêng 5x1010 CFU/g); 0,128 g sinh khối L. plantarum (SK riêng 2x1011CFU/g); 0,033g B. longum (SK riêng 8 x1010 CFU/g) và 0,1 g sinh khối B. lactiCs (SK riêng 1011 CFU/g) được chọn lựa để tạo chế phẩm synbiotic.
Kết quả nghiên cứu của luận áncũng phù hợp với kết quả nghiên cứu của tác giả Li và cộng sự (2018) về hoạt tính prebiotic của 3 loại Inulin dạng fructan trong loài C. pilosula đến vi khuẩn B. longum khi bổ sung vào môi trường nuôi cấy (MRS) với nồng độ 2%. Cơ sở để
giải thích được cho là DP (Degree polimer) của fructan là chìa khóa quyết định mà trong đó bao gồm các yếu tố như cấu trúc hóa học, số lượng các đơn vị monomer, DP và liên kết mạch thẳng hay mạch nhánh cũng như khả năng hòa tan trong nước [93].
124
Với những phân tích ở trên, có thể thấy rằng bột inulin đảng sâm có đặc tính prebiotic cao, kích thích vi khuẩn đơn lẻ gia tăng mật độ cao hơn khi phối hợp nhiều chủng vì bản chất các vi khuẩn có đặc tính giống nhau sẽ cạnh tranh dinh dưỡng.
Từ các kết quả nghiên cứu đã xác định được công thức tối ưu cho việcphối trộn tạo synbiotic (g/g): hàm lượng bột inulin đảng sâm 0,514 g được phối trộn với sinh khối L. acidophillus 0,22 g (SK riêng 5x1010 CFU/g); 0,128 g sinh khối L. plantarum (SK riêng 2 x 1011 CFU/g); 0,033 g B. longum (SK riêng 8 x 1010 CFU/g) và 0,1g sinh khối B. lactiCs (SK riêng 1011 CFU/g) được chọn lựa để tạo chế phẩm synbiotic.
3.7. THỬ NGHIỆM CHẾ PHẨM SYNBIOTIC TRÊN CHUỘT THÍ NGHIỆM3.7.1. Thử nghiệm độc tính cấp 3.7.1. Thử nghiệm độc tính cấp
Chế phẩm synbiotic được phân tán trong nước cất ở nồng độ cao nhất có thể cho
chuyển qua được kim cho chuột uống là 0,73 g/ml. Sau khi cho chuột uống chế phẩm synbiotic với liều cao nhất có thể chuyển qua kim là 36,5 g/kg (tương ứng với thể tích cho uống tối đa là 50 ml/kg). Kết quả cho chuột uống chế phẩm synbiotic cho thấy chuột khơng có biểu hiện gì bất thường trong vịng 72 giờ và tiếp tục theo dõi chuột trong 14 ngày cho
thấy chuột sống khỏe mạnh, hoạt động, di chuyển, ăn uống, đi tiểu bình thường, lơng mượt, mắt sáng, phân khơ và khơng có chuột nào chết trong suốt q trình thử nghiệm. Mặt khác, kết quả cân trọng lượng chuột thử nghiệm độc tính (Bảng 3.29) cho thấy chuột tăng trưởng đều, ổn định.