Độ tan Số ml dung mơi hịa tan 1 g chất thử
Rất tan Dưới 1 Dễ tan 1-10 Tan 10-30 Hơi tan 30-100 Khó tan 100-1 000 Rất khó tan 1 000-10 000 Thực tế không tan Trên 10 000
* Xác định chỉ tiêu vi sinh vật: chỉ tiêu vi sinh vật của bột củ đẳng sâm được xác
định theo QĐ số 46/2007/QĐ-BYT. Ngày 19/12/2007*.
2.3.7. Phương pháp định lượng vi sinh vật
* Xác định số lượng tế bào vi sinh vật bằng phương pháp đếm khuẩn lạc MPN
(Most Probable Number) theo QĐ số929/QĐ-ATTP ngày 08/11/2017.
* Xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí (CFU/g): theo TCVN 4884-1:2005. * Xác định tổng số vi khuẩn E. coli (CFU/g): theo TCVN 7924-2:2008. * Xác định C. perfringens (CFU/g): theo TCVN 4991:2005.
* Xác định Salmonella spp (có hoặc KPH/25g) theo TCVN 4829:2005. * Tổng số bào tử nấm men, nấm mốc (CFU/g) theo TCVN 8275-1 & 2:2010.
2.3.8. Đánh giá hoạt tính prebiotic
+ Kiểm tra mật độ vi sinh vật của dịch ni cấy vi khuẩn có bổ sung bột đảng sâm sấy phun bằng phương pháp pha loãng mẫu theo TCVN 9635:2013/ ISO 29981:2010.
46
+ Kiểm tra đặc tính prebiotic thơng qua đếm tổng số lượng khuẩn lạc vi khuẩn thử nghiệm bằng phương pháp trải đĩa.
Hình 2.7. Sơ đồ phương pháp trải đĩa
Tổng số vi khuẩn trong mẫu (CFU/g hay CFU/ml)
Mật độ tổng số vi khuẩn trong 1g hay 1ml mẫu được tính theo cơng thức sau:
A (CFU/g hay CFU/ml) = N
n1. V. f1 +….+ ni .V. fi Trong đó:
A – Số tế bào (đơn vị hình thành khuẩn lạc) vi khuẩn trong 1g hay 1ml mẫu. N – Tổng số khuẩn lạc đếm được trên các đĩa đã chọn.
ni – Số lượng đĩa cấy tại độ pha lỗng thứ i.
V – Thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào trong mỗi đĩa. fi – Độ pha loãng tương ứng.
Sinh khối của 8 chủng vi khuẩn lactic trong danh sách các loài vi khuẩn probiotic theo TCVN 9633:2013: Giống vi khuẩn khởi động-Tiêu chuẩn nhận dạng được thử nghiệm [23].
2.3.9. Phương pháp thử nghiệm chế phẩm synbiotic trên chuột thí nghiệm 2.3.9.1. Khảo sát độc tính cấp 2.3.9.1. Khảo sát độc tính cấp
Nguyên tắc: cho chuột thử nghiệm dùng synbiotic qua đường uống trong cùng điều kiệnnhư nhau và quan sát các phản ứng xảy ra trong vòng 72 giờ.
47
Thực hiện: thử nghiệm trên 10 chuột (50% đực, 50% cái), nhịn đói ít nhất 12 giờ
trước khi cho uống mẫu thử liều duy nhất tối đa qua đường uống với thể tích tối đa 50
ml/kg. Theo dõi và ghi nhận cử động tổng quát, biểu hiện về hành vi, trạng thái lông, ăn
uống, bài tiết nước tiểu và số lượng chuột chết trong vòng 72 giờ. Nếu sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường hoặc chết, tiếp tục theo dõi trong vòng 14 ngày [7, 10].
2.3.9.2. Khảo sát tác động điều trị tiêu chảy cấp của chế phẩm synbiotic
Khảo sát tác động điều trị tiêu chảy cấp của chế phẩm synbiotic trên mơ hình chuột nhắt gây tiêu chảy do kháng sinh: Chuột đực khỏe mạnh, bình thường, được chia ngẫu
nhiên vào các lô (8 chuột/lô): chứng sinh lý (lô 1: SL), chứng bệnh (lô 2: CB), đối chiếu Bioflora (lô 3: ĐC) và lô mẫu thử (lô 4: Thử). Chuột ở lô 2, 3 và 4 được gây tiêu chảy bằng cách cho uống hỗn hợp kháng sinh streptomycin liều 2 g/kg và lincomycin liều 3 g/kg, 2 lầnmỗi ngày trong 4 ngày liên tục, thể tích cho uống 10 ml/kg. Sau 4 ngày, tồn
bộ chuột thử nghiệm được cho uống hỗn hợp kháng sinh đều có triệu chứng tiêu chảy: phân mềm/lỏng, số lần đại tiện tăng, có thể có tình trạng bị dính bẩn ở hậu mơn. Từ ngày
5, chuột lô đối chiếu được cho uống Bioflora liều 0,067 viên/kg/ngày; lô mẫu thử được cho uống synbiotic liều 1,2 g/kg/ngày; chuột lô chứng bệnh được cho uống nước cất
trong 7 ngày liên tục, 2 lần mỗi ngày. Trong 7 ngày điều trị, lô 2 đến lô 4 tiếp tục được
cho uống hỗn hợp kháng sinh với liều bằng ¼ liều ban đầu để hạn chế sự tự hồi phục.
Lô chứng sinh lý được cho uống nước muối sinh lý trong suốt thử nghiệm. Ghi nhận trọng lượng cơ thể và đánh giá tình trạng tiêu chảy của chuột thử nghiệm hàng ngày theo
tiêu chuẩn trong bảng 2.5 [30, 95, 166].