Nhiệt độ
(oC)
Mẫu tự kết tủa
Nồng độ dung môi Ethanol
80% 90% Hàm lượng saccharide (mg/g khô) Hàm lượng inulin (mg/g khô) Hiệu suất (%) Hàm lượng fructan (mg/g khô) Hiệu suất (%) (6±1) 22,33c ±2,04 222,66a ± 5,09 95,53 278,90a ±2,16 94,84 - (11±1) 36,98b ±2,43 224,19a ± 8,71 96,19 279,67a ± 4,80 95,10 - (17±1) 86,23a ±1,66 224,21a ± 5,38 96,20 279,73 a ±6.16 95,12
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau trong cùng một cột thì khác nhau (p<0,05)
Mặt khác, kết quả nghiên cứu cũng cho thấy khi kết tủa inulin bằng cồn ở nồng độ
gây kết tủa 80% thì hàm lượng thu inulin thu được ở cả 3 ngưỡng nhiệt độ -(17±1) oC, -(11±1) oC và (6±1) oC khơng có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê, tức nhiệt độ không
ảnh hưởng tới hàm lượng kết tủa và hàm lượng inulin kết tủa thu được trong khoảng
(222,66÷224,21) mg/g khơ với hiệu xuất kết tủa khoảng (95,53÷96,20) %. Trong khi
đó, kết tủa fructan bằng cồn ở nồng độ gây kết tủa 90% thì hàm lượng fructan thu được ở cả 3 ngưỡng nhiệt khơng có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê và hàm lượng fructan
kết tủa thu được trong khoảng 278,90 ÷ 279,73 mg/g khơ với hiệu xuất kết tủa vào khoảng (94,84÷95,12) %.
Như vậy, quá trình kết tủa inulin và fructan bằng ethanol thì nhiệt độ khơng có ảnh hưởng tới hàm lượng inulin và fructan thu được sau kết tủa. Do vậy, để tiết kiệm chi phí
nên kết tủa inulin và fructan bằng ethanol ở nhiệt độ (6±1) oC. Mặt khác, khi kết tủa bằng ethanol thì hàm lượng inulin và fructan thu được cao gấp từ 2,6 ÷ 10 lần so với tự
kết tủa trong nước lạnh. Do vậy, chỉ nên sử dụng ethanol để kết tủa inulin và fructan.
Từ tất cả các kết quả phân tích ở trên phép chọn ethanol ở nồng độ 80% và 90% để kết tủa inulin và fructan; nhiệt độ lưu trữ trong quá trình kết tủa là (6±1) oC và nhiệt độ cô đặc 55oC.
90
3.4. NGHIÊN CỨU TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC PHÂN TỬ CỦA PHÂN TỬ INULIN TỬ CỦA PHÂN TỬ INULIN
3.4.1. Nghiên cứu tinh sạch inulin
Để có thể thu nhận inulin củ đẳng sâm tinh sạch, luận án tiến hành thu nhận bột
saccharide thô từ củ đẳng sâm theo cách thức sau: chiết dịch chiết inulin từ củ đẳng sâm
theo quy trình đã đề xuất ở trên, cơ đặc dịch chiết đến 16oBx, kết tủa saccharide thô bằng Ethanol ở nồng độ 90% để gây kết tủa và giữ hỗn hợp kết tủa ở nhiệt độ lạnh (6±1) oC trong 24 h. Sau đó, ly tâm lạnh thu kết tủa với tốc độ 13000 vòng/phút ở nhiệt độ 16oC trong 16 phút. Kết tủatiếp tụcđược sấy khô ở 55oC đến trọng lượng không đổi tạo thành bột saccharide thô và sử dụng bột này để tái kết tủa phân đoạn thu inulin tinh khiết. Bột
saccharide thô được pha thành dung dịch 10000 ppm và tiến hành tái kết tinh 6 lần bằng Ethanol ở nồng độ 80% gây kết tủa để thu inulin tinh sạch. Sau đó, tiến hành sử dụng inulin tinh sạch (mầu trắng ngà) để chạy sắc ký bản mỏng silicagel với chất chuẩn là
inulin (Merck) có Mw (Molecular weight) là 3190 Da. Kết quả sắc ký tinh sạch và chạy
sắc ký đượctrình bày ở các bảng 3.13, 3.14 và hình 3.25.