CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM
2.2. Thực nghiệm
2.2.1.1. Chiết tách, tinh chế và bảo quản lycopen từ quả gấc
i) Công đoạn 1: Sấy màng gấc tươi
- Quy trình sấy màng gấc tươi:
Hình 2.1. Quy trình sấy màng gấc tươi
- Trong thí nghiệm, màng gấc được sấy ở các nhiệt độ khác nhau. Trong quá trình sấy xác định độ ẩm của mẫu gấc và dừng việc sấy khi độ ẩm của mẫu gấc không đổi, hoặc thay đổi rất chậm.
- Độ ẩm cuối cùng của màng đỏ gấc sau khi sấy được đo nhanh bằng máy
MRS 120-3 của hãng Kern, Đức.
- Đánh giá bằng cảm quan màu sắc màng gấc theo thời gian và nhiệt độ sấy khác nhau.
ii) Công đoạn 2: Chiết tách và tinh chế lycopen từ màng gấc khô
1 kg màng gấc khô (độ ẩm ~7%) được xếp chặt trong túi lọc đặt trong bình trích ly. 1,5 lít dung mơi trích ly diclometan hoặc tetrahydrofuran hoặc chloroofom từ bình cầu được đun sôi theo đường ống dẫn hơi đi lên, gặp hệ thống sinh hàn ngưng tụ lại trong bình trích ly. Dung mơi hịa tan và trích các carotenoid trong
màng gấc, khi đạt một lượng dung môi nhất định sẽ hồn lưu về bình cầu. Q trình tiếp tục diễn ra trong khoảng thời gian 3 giờ cho đến khi dung dịch đi xuống từ ống hoàn lưu dung môi nhạt màu chứng tỏ q trình trích ly kiệt màng gấc đã hoàn thành. Phương pháp được tiến hành trong điều kiện áp suất thường. Quá trình chiết bằng phương pháp Soxhlet được thể hiện trên Hình 2.2.
Sau đó, dịch chiết màng gấc khô được cô đặc bằng thiết bị cất quay chân khơng để thu hồi dung mơi. Q trình cất quay được kết thúc khi thể tích hỗn dịch khơng thay đổi. Hỗn dịch sau cô đặc gồm các carotenoid như lycopen, beta- carotene, dầu gấc chứa các acid béo (omega-3, omega-6)… Với 1 lít dịch chiết cơ
đặc sẽ được thêm vào 2 lít dung môi ethanol. Hỗn dịch được rung siêu âm khoảng 15 phút ở nhiệt độ thường để hỗ trợ khả năng phân tán của dịch chiết vào ethanol. Lycopen dần kết tủa và hỗn dịch được để qua đêm để quá trình kết tinh lycopen được
hoàn toàn. Tiếp theo, hỗn dịch được lọc chân không để thu phần chất rắn chứa
lycopen trên phễu lọc. Phần dịch chiết được cất quay chân không để tách ethanol khỏi
dầu gấc. Phần chất rắn chứa lycopen được tái phân tán trong ethanol, rung siêu âm
trong 10 phút và lọc chân không. Quá trình tái phân tán, lọc rửa trong ethanol được thực hiện trong 2 lần. Cuối cùng, thu được khoảng 3,2-4,4 g lycopen tinh khiết có màu đỏ tía.
Quy trình chiết tách và tinh chế lycopen từ màng gấc khô được tổng hợp lại
Mànggấckhô Dung môi hữu cơ
Hệ thống chiếtSoxhlet
Dịch chiết
Dịch chiếtcôđặc
Cấtquay loạidung môi
Lycopen tinhthể
Dung môi ethanol
Lycopen
tinhkhiết
Lọc, rửa, sấy
Hình 2.2. Sơ đồ khối quy trình chiết tách và tinh chế lycopen
iii) Công đoạn 3: Nghiên cứu độ bền của lycopen theo thời gian
Sự phân hủy của lycopen theo thời gian bảo quản ở các điều kiện bảo quản khác nhau được xác định bằng quang phổ hấp thụ UV-Vis.
Các mẫu nghiên cứu được đo phổ truyền qua trên máy SP-3000 nano, phòng
Polymer chức năng và Vật liệu nano, Viện Hóa học với dải sóng từ 200 tới 800 nm.
Mẫu bột lycopen ở các điều kiện bảo quản khác nhau được hịa tan hồn tồn trong dung môi tetrahydrofuran và được pha loãng tới một nồng độ thích hợp trước khi chụp phổ.