CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.13. tiêu hóa invitro
Sự thay đổi các phân đoạn tiêu hóa của các mẫu tinh bột được thể hiện thông qua phương
pháp đo độ tiêu hóa invitro. Độ tiêu hóa của tinh bột được xác định theo phương pháp của
(Englyst, H. N., Kingman, S. M., & Cummings, J. H., 1992) và biến đổi một chút theo (Shin, S. I., Lee, C. J., Kim, D. I., Lee, H. A., Cheong, J. J., Chung, K. M., ... & Moon, T. W., 2007). Pancreatin (0,3g, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co. Ltd) được hòa tan vào trong
24mL nước cất và khuấy trộn trong 25 phút. Sau đó, hỗn hợp này được ly tâm 3000xg trong 10
phút, kế đến lấy 20mL dịch nổi hòa với 3,6mL nước cất và 0,4mL (300U) amyloglucosidase (AMG 300L, Angel Yeast Co. Ltd). Dung dịch enzyme này lưu trữ ở bể điều nhiệt 37°C ít nhất 10 phút.
Mỗi mẫu tinh bột (0,12g) được cho vào ống ly tâm cùng với 3 hạt bi thủy tinh. Sau đó thêm 3,0mL đệm sodium acetate buffer (0,1M; pH 5,2), ống sẽ được ổn nhiệt ở 37°C trong bể
điều nhiệt. Tiếp theo, thêm 3,0mL dung dịch enzyme đã được chuẩn bị vào ống ly tâm và lắc
36
Phản ứng được dừng ở 10 và 240 phút bằng cách đun sôi 15 phút để bất hoạt enzyme ở cả mẫu hồ hố và khơng hồ hoá, các ống ly tâm sẽ được để nguội về nhiệt độ phịng. Sau đó, các
ống này sẽ được ly tâm ( máy ly tâm HERMLE Z366, Đức) ở 3000×g trong 15 phút để thu phần
dịch trong.
Lượng glucose trong dịch nổi được đo bằng phương pháp Dinitrosalicylic acid (DNS). Các phân đoạn tiêu hóa của tinh bột được phân loại dựa trên tốc độ thủy phân. RDS và SDS được đo bằng nồng độ glucose sau phản ứng thủy phân xúc tác bởi enzyme ở 10 và 240 phút.
RS là phần khơng bị tiêu hóa sau 240 phút.
Phương trình phản ứng tạo màu giữa đường khử và DNS acid:
3
H2O →
3
3,5-dinitrosalicylic acid 3-amino, 5-dinitrosalicylic acid