3.7.1 Các thông số của cột sắc ký
- Khối lƣợng silica gel nạp cột: 30 g.
- Chiều cao lớp silica gel khi nạp vào cột: 22 cm.
- Khối lƣợng cao PE nạp cột: 3 g.
- Chiều cao lớp mẫu khi mới nạp vào cột: 0.5 cm.
Dung mơi đƣợc chọn để hịa tan mẫu: PE.
Dung môi đƣợc chọn làm dung môi giải ly đầu tiên cho cột: PE.
Hình 31 Cột sắc ký cao PE 3.7.2 Theo dõi quá trình giải ly cột
Giải ly cột với dung môi tinh khiết, độ phân cực tăng dần từ PE 100% đến Ea.
Dung môi giải ly ra khỏi cột đƣợc hứng trong các lọ bi có thể tích là 20 mL, đƣợc đánh số thứ tự sẵn.
Sau đó chấm TLC các lọ này theo thứ tự đã đánh sẵn. Các vết chấm đƣợc so sánh trong cùng một bản mỏng và cùng một hệ dung môi giải ly bản mỏng, để việc so sánh giá trị Rf dễ dàng, từ đó gom chung các lọ có giá trị Rf giống nhau thành một phân đoạn.
Do thời gian từ lúc nạp mẫu đến lúc các chất bắt đầu giải ly ra khỏi cột khá nhanh, nên chúng tôi chọn dung môi giải ly bản mỏng đầu tiên là PE 100% với dung dịch thuốc thử hiện hình bản mỏng là: H2SO4 20% trong methanol.
Bảng 2 Kết quả Sắc ký cột cao PE Số thứ tự lọ phân đoạn Hệ dung môi giải ly cột Hệ dung môi giải ly bản mỏng Chất thu đƣợc Khảo sát TLC 1-20 I PE PE:Ea = 90:1 Chất lỏng sệt không màu 1 vết khá rõ
21-67 II PE:Ea = 98:2 PE:Ea = 8:2 Hạt li ti không màu ở đáy lọ
2 vết khá rõ và phía trên, cịn
vài vết mờ
68-99 III PE:Ea = 97:3 PE:Ea = 7:3
Tinh thể màu vàng ở đáy lọ, thành lọ có váng màu trắng trong 2 vết khá rõ
100-120 IV PE:Ea = 97:3 PE:Ea = 7:3 Tinh thể màu trắng.
Một vết chính rất đậm và có những vết tạp.
121-157 V PE:Ea = 95:5 PE:Ea = 7:3 Hạt li ti màu
vàng nhạt Ba vết khá rõ
157-200 VI PE:Ea = 9:1 PE:Ea = 7:3 Hạt li ti không màu
Hai vết khá rõ và vài vết mờ
200-252 VII PE:Ea = 8:2 PE:Ea = 7:3 Chất rắn màu
trắng mịn Nhiều vết
Xả cột MeOH Chất rắn màu
Hình 32 TLC một vài phân đoạn
Sau khi sắc ký cột tơi thu đƣợc nhiều phân đoạn, trong đó phân đoạn IV là đáng chú ý nhất, do có khối lƣợng tƣơng đối lớn hơn và khi khảo sát bằng TLC thì cho thấy một vết khá rõ có lẫn vết tạp mờ. Tôi quyết định khảo sát phân đoạn IV trƣớc, các phân đoạn còn lại tạm để lại, sẽ khảo sát sau.
Hình 33 Lọ đựng tinh thể của phân đoạn IV