Chương 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nghiên cứu thực nghiệm
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu thực nghiệm
Đối tượng nghiên cứu là các răng của người cao tuổi được nhổ ra do bệnh lý quanh răng.
- Tiêu chuẩn lựa chọn: răng khơng bị sâu vỡ, thân và chân răng cịn nguyên vẹn. Chỉ số Diagnodent 13.
- Tiêu chuẩn loại trừ: răng có lỗ sâu chẩn đoán theo ICIDAS, thân hoặc chân răng bị gãy, vỡ hoặc răng có chỉ số Diagnodent >13.
2.1.2. Địa điểm nghiên cứu
- Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt - Trường Đại học Y Hà Nội - Khoa Hình thái, Viện 69 - Bộ Tư lệnh Lăng.
2.1.3. Phương pháp nghiên cứu
Là nghiên cứu invitro - nghiên cứu thực nghiệm trong phịng thí nghiệm nhằm xác định những bằng chứng ngấm fluor vào men và ngà răng ở NCT sau khử khống. Mơ tả hình thái dưới kính hiển vi điện tử qt.
2.1.4. Quy trình tiến hành nghiên cứu
2.1.4.1. Vật liệu và công cụ thu thập thông tin
+ Ghế nha khoa
+ Máy lấy cao răng siêu âm + Khay quả đậu, gắp
+ Tay khoan chậm đầu thẳng
+ Đĩa cắt kim cương kích thước 15 x 0,1mm; 20 x 0,1mm + Bàn chải răng lông mềm
+ Máng áp gel
+ Lọ thủy tinh nút mài
+ Thiết bị Diagnodent 2190-KaVo (Đức). - Dụng cụ và vật liệu trong phịng thí nghiệm
+ Kính hiển vi điện tử quét + Khay thủy tinh có chia ơ + Cốc thủy tinh các loại.
Hình 2.1. Kính hiển vi điện tử quét JSM - 5410LV
(Nguồn: Khoa Hình thái - Viện 69 – Bộ Tư lệnh Lăng)
- Hóa chất
+ Nước bọt nhân tạo. + Axit phosphoric 37%
+ Kem chải răng P/S người lớn + Gel fluor 1,23%
+ Cồn 500, 700, 850, 960, 1000. + Ether nguyên chất.
+ Vàng (Desk II, Dentor Moorestown, NJ, United States).
2.1.4.2. Các bước tiến hành nghiên cứu
* Bước 1: Chuẩn bị mẫu răng nghiên cứu
- Mẫu nghiên cứu gồm 30 răng NCT các loại đã nhổ, được bảo quản trong lọ đựng nước bọt nhân tạo.
- Răng được lấy sạch cao răng, đánh bóng bằng chổi cước. - Đo chỉ số Diagnodent trước khi khử khoáng.
- Đánh dấu thống nhất vị trí đo và can thiệp trên các răng bằng tay khoan chậm và đĩa cắt kim cương kích thước 15 x 0,1mm. Tất cả các răng được can thiệp tại 2/3 trên mặt ngoài thân răng và 2/3 dưới mặt ngồi chân răng.
- Khử khống vùng can thiệp ở thân và chân răng bằng axit phosphoric 37% trong 15 giây. Rửa sạch bằng tay xịt hơi nước của ghế nha khoa.
- Thổi khơ. Đo chỉ số Diagnodent sau khi khử khống. - Ngâm răng trong nước bọt nhân tạo.
* Bước 2: Can thiệp trên mẫu răng
Các răng sau khi khử khống được chia thành 2 nhóm: - Nhóm 1: gồm các răng được áp gel fluor 1,23%
Lấy gel vào máng. Đặt vị trí răng đã được khử khoáng vào máng gel fluor 1,23% trong 4 phút. Rửa sạch răng dưới vòi nước chảy trong 1 phút.
- Nhóm 2: gồm các răng được chải bằng kem chải răng P/S người lớn Lấy kem vào bàn chải. Chải vùng khử khoáng trong thời gian 4 phút. Rửa sạch răng dưới vòi nước chảy trong 1 phút.
- Chuyển cắt răng: Sử dụng tay khoan chậm và đĩa cắt kim cương kích thước 20 x 0,1mm. Cắt dọc và cắt ngang qua thân và chân răng tại trung tâm vùng can thiệp. Lưu ý sử dụng tốc độ thấp và tưới nước muối sinh lý trong khi cắt.
- Dùng bàn chải lông mềm chải nhẹ bề mặt mẫu răng dưới vòi nước chảy. - Ngâm mẫu trong nước bọt nhân tạo và chuyển phịng thí nghiệm.
Hình 2.2. Răng sau khi được chải kem và áp gel fluor
(Nguồn: Đề tài Nghiên cứu sinh) * Bước 3: Xử lý mẫu
- Khử nước trong các mẫu bằng cồn có nồng độ tăng dần theo qui trình
+ Cồn 500 x 5 phút/lần x 1 lần
+ Cồn 700 x 20 phút/lần x 1 lần
+ Cồn 850 x 20 phút/lần x 1 lần
+ Cồn 960 x 20 phút/lần x 1 lần
+ Cồn 1000 x 20 phút/lần x 2 lần. - Khử cồn trong các mẫu bằng ether
+ Cồn 1000 + ether nguyên chất (tỉ lệ 1/1) x 20 phút/lần x 1 lần.
+ Ether nguyên chất x 20 phút/lần x 1 lần.
+ Làm khơ mẫu trong khơng khí. - Mạ phủ mẫu
+ Gắn mẫu trên đế mang mẫu của kính hiển vi điện tử bằng băng dính cacbon chuyên dụng.
+ Mạ phủ mẫu bằng vàng trên máy mạ phủ JFC-1200 (Nhật Bản) với thời gian 55 giây.
Hình 2.3. Răng sau khi được mạ phủ gắn trên đế mang mẫu
(Nguồn: Đề tài Nghiên cứu sinh)
2.1.4.3. Đánh giá kết quả
- Soi mẫu dưới kính hiển vi điện tử quét JSM - 5410LV của Nhật Bản ở độ phóng đại khác nhau.
- Đánh giá bề mặt thân và chân răng NCT trước khử khoáng, sau khử khoáng, sau chải kem đánh răng và áp gel fluor 1,23%.