Phiên mã
RNA
T7
Mồi
2.3.1.4. Phân tích và tính tốn số liệu
Nồng độ ARN được tính tốn dựa vào kích thước, OD, cấu trúc phân tử
ARN (ARN sợi đơn) và hệ số chuyển đổi Avogadro.
2.3.2. Xác định tỷ lệ nhiễm cúm
2.3.2.1. Phương pháp nghiên cứu
Quan sát mô tả cắt ngang sử dụng kỹ thuật RT-PCR đơn mồi, đa mồi
và PCR bán tổ với biến số có tính chất định tính và là biến nhị phân (nhận giá
trị dương tính hoặc âm tính). Các biến số sẽ được phân tích theo giới tính
(nam, nữ), nhóm tuổi (<1 tuổi, 1-5 tuổi, 6-18 tuổi, 19-64 tuổi, và >64 tuổi), và thời gian (tháng, mùa, năm).
2.3.2.2. Cỡ mẫu nghiên cứu
Tính theo cơng thức tính cỡ mẫu cho nghiên cứu mô tả cắt ngang, sử dụng tỷ lệ mắc cúm trung bình tồn cầu khơng phải đại dịch (5 - 20%) [27];
Trong đó:
n: cỡ mẫu nghiên cứu;
Z = 1,96 với độ tin cậy 95%;
p: tỷ lệ nhiễm ước lượng = 15%; q = 1-p;
d: độ chính xác tuyệt đối của p = 1,5% = 0,015. 2 2 ) 2 / 1 ( d q p Z n
Thay vào công thức trên ta có:
= 1,96 × 0,15 × 0,85
( 0,015) = 1110
Số mẫu nghiên cứu tối thiểu là 1110 mẫu. Trên thực tế, 1273 bệnh
phẩm đã được thu thập liên tục trong 2,5 năm cho đề tài nghiên cứu này. 2.3.2.3. Kỹ thuật xét nghiệm
Lấy bệnh phẩm dịch mũi họng: Mỗi bệnh nhân SARI được lấy bệnh
phẩm bằng 2 tăm bông sợi polyester vô trùng, một tăm bông lấy bệnh phẩm ở
mũi, một tăm bông lấy bệnh phẩm ở hai bên niêm mạc miệng và thành sau họng. Đưa tăm bông vào lỗ mũi (cả hai lỗ mũi) theo chiều song song với vòm họng, giữ vài giây, sau đó rút nhẹ nhàng, vừa rút vừa xoay. Với bệnh phẩm
họng, bệnh nhân há miệng, thầy thuốc dùng dụng cụ chuyên dụng đè lưỡi bệnh nhân, dùng tăm bông xát và xoay nhẹ nơi tổn thương 2 bên niêm mạc
má và thành sau họng. Xác định chất lượng lấy bệnh phẩm bằng cách quan sát sẽ thấy có một ít bệnh phẩm dính vào tăm bơng là được. Cho cả 2 tăm bông
vào ống nhựa vô trùng đựng sẵn dung dịch môi trường bảo quản và vận
chuyển virus và vận chuyển ở điều kiện 4o
C về Trung tâm Y tế dự phòng Tỉnh
Hải Dương cùng ngày để giữ lâu dài ở -80oC trước khi chuyển về Viện Vệ
sinh Dịch tễ Trung ươngđể xử lý mẫu, tách chiết ARN và tiến hành phản ứng