2.3.1.2. Thuyết minh quy trình
Xử lý nguyên liệu
Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường trực thuộc trường Đại học Nông lâm thu hoạch nấm linh chi tươi từ 13/01/2020 đến 16/01/2020 được cắt rễ, sau đó rửa sạch rồi sấy đối lưu ở nhiệt độ 58℃. Sau khi sấy, đóng gói bảo quản trong các túi zip với độ ẩm của nấm dưới 13%. Sau khi thu mua thành phẩm thì tiến hành xay thành bột.
Điều chế cao trích bằng phương pháp ngâm dầm
Cao trích của 6 loại nấm linh chi được điều chế bằng cách cân 100g bột nấm linh chi cho vào hũ thủy tinh tối màu với dung mơi EtOH 960 (ngun liệu/dung mơi=1/5). Sau đó sẽ thay dung môi sau mỗi 24 giờ và lọc bằng giấy lọc cho đến khi dịch lọc trong (khoảng 3
Nấm linh chi khơ Xay bột Trích ly ngâm dầm với EtOH 960 Cơ quay Sấy Cao trích
28
– 4 lần). Tiến hành lọc dịch một lần nữa trước khi cơ quay với nhiệt độ 50℃, 110 vịng/ phút trong vịng 20 – 30 phút. Cao trích sau khi cơ quay được cho vào hũ thủy tinh nhỏ (10ml) tối màu và sấy ở nhiệt độ 45 - 50℃, sau đó mẫu cao trích được cân lại bằng cân phân tích để tính hiệu suất thu hồi và được bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 4℃.
Cơng thức tính hiệu suất thu hồi của cao trích trên g mẫu như sau:
H= 𝐊𝐡ố𝐢 𝐥ượ𝐧𝐠 𝐜𝐚𝐨 𝐭𝐫í𝐜𝐡
𝐊𝐡ố𝐢 𝐥ượ𝐧𝐠 𝐦ẫ𝐮 × 𝟏𝟎𝟎 (%)
Bảng 2.1. Phân loại các mẫu cao trích
STT Ký hiệu Tên mẫu
1 E-VN Linh chi Việt Nam
2 E-HQ Linh chi Hàn Quốc
3 E-NB Linh chi Nhật Bản
4 E-HC Linh chi hồng chi
5 E-SH Linh chi sừng hươu
Địa điểm thực hiện: Phịng thí nghiệm trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp. Hồ Chí Minh. 2.3.2. Sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa và ức chế tyrosinase
2.3.2.1. Định lượng hàm lượng tổng polyphenol
Nghiên cứu này sử dụng phương pháp so màu với thuốc thử Folin – Ciocalteu (Tiêu chuẩn quốc gia, TCVN 9745:2013, ISO 14502:2005) để định lượng hàm lượng tổng polyphenol.
Nguyên tắc
Polyphenol từ cao trích đã được nghiền mịn hoặc ở dạng cao chỉ còn một lượng nhỏ dung môi được chiết bằng methanol 70% ở 70℃. Các polyphenol trong dịch chiết được xác định bằng đo màu với thuốc thử Folin – Ciocalteu trong môi trường kiềm. Thuốc thử này chứa chất oxi hóa là axit phospho – vonframic, trong quá trình khử của nhóm hydroxyl phenol dễ bị oxi hóa sinh ra màu xanh có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 760 nm. Phản ứng này là do sự hình thành màu xanh của vonfram và molypden.
Quy trình
- Mẫu Blank thiết bị: Lấy 10ml nước cất chuyển vào ống nghiệm
- Mẫu Blank quy trình: Lấy 10ml MeOH:H2O (7:3) vào ống nghiệm. Sau đó tiến
hành pha lỗng theo hệ số F
Quy trình dựng đường chuẩn Acid galic
Lấy lần lượt 1,3ml gallic acid ở các nồng độ 1;2,5;10;20 và mẫu blank thiết bị vào các ống hach. Sau đó, cho vào 1ml Folin 20% vào các ống hach chứa gallic acid ở các nồng
29
độ khác nhau. Lắc đều và để yên 3 – 8 phút ở nhiệt độ phòng. Tiếp theo thêm 700μl Na2CO3 10% vào các ống hach và để yên ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Cuối cùng do mật độ quang trong cuvet thủy tinh cho chiều dài đường quang 10mm trên máy đo quang phổ (UH5300 UV/Vis) ở bước sóng 760nm.
Phương trình đường chuẩn
y=0.0601x+0.012 (R² = 0.9998)
Quy trình định lượng tổng hàm lượng polyphenol