0,200g cao trích Ống nghiệm Votex 5 phút (2 lần) Li tâm 3500 rpm 10 phút Dịch chiết
Pha loãng theo hệ số F Nước cất MeOH:H2O (7:3) Lấy 1,3ml mẫu Lắc đều Để yên 3 – 8 phút Để yên nhiệt độ phồng 30 phút Đo mật độ quang 760nm Folin 20% Na2CO3 10%
30
Thuyết minh quy trình
Đầu tiên cân chính xác 0,200g mẫu cao trích cho vào ống thủy tinh (ống nghiệm thủy tinh có nắp hoặc ống hach) và pha với 10ml hỗn hợp dịch chiết MeOH:H2O (7:3) ở 70℃ vào ống chiết. Sau đó đậy nắp và trộn trên máy vortex. Sau đó đun nóng ống hach trong bể điều nhiệt ở 70℃ trong vòng 10 phút và tiếp tục vortex các ống chiết sau mỗi 5 phút (2 lần). Tiến hành ly tâm với vận tốc 3500r/min trong vịng 10 phút, sau đó gạn dịch trong. Nếu dịch khơng trong thì tiến hành lọc nylon 2μm.
Cho 0,5ml dung dịch đã chiết vào bình định mức 10ml. Pha loãng bằng nước cất đến vạch và lắc đều. Sau đó, thực hiện bước lên màu và đánh giá mật độ quang có nằm trong khoảng mật độ quang của đường chuẩn gallic acid hay không. Nếu khơng tiến hành pha lỗng với hệ số F thích hợp. Kế tiếp lấy lần lượt 1,3ml của mẫu dịch chiết đã pha loãng theo hệ số F, mẫu blank thiết bị, mẫu blank quy trình vào các ống hach. Cho vào 1ml Folin 20% vào các ống hach chứa các mẫu. Lắc đều và để yên 3 – 8 phút ở nhiệt độ phòng. Thêm 700μl Na2CO3 10% vào các ống hach và để yên ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Cuối cùng đo mật độ quang trong cuvet thủy tinh cho chiều dài đường quang 10mm trên máy đo quang phổ (UH5300 UV/Vis) ở bước sóng 760nm.
Địa điểm thực hiện: Phịng thí nghiệm trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Tp. Hồ Chí Minh 2.3.2.2. Xác định hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH
Nguyên tắc
Phương pháp ức chế gốc tự do với DPPH (1,1 – diphenyl – 2 – picryhydraxyl) dựa vào phản ứng khử của DPPH với polyphenol (Dehpour, 2009). Các electron đơn lẻ trên nguyên tử N của phân tử DPPH được khử bằng cách tiếp nhận một nguyên tử hydro từ chất chống oxy hóa tạo thành hydrazine tương ứng. Sau phản ứng, màu của dung dịch phản ứng nhạt dần, chuyển từ màu tím sang vàng nhạt và bị giảm độ hấp thu ở bước sóng xác định. Giá trị mật độ quang OD càng thấp chứng tỏ khả năng bắt gốc tự do DPPH càng cao.
Quy trình xác định chất đối chứng dương với gallic acid
Sử dụng gallic acid 100 mg/L pha loãng theo các nồng độ 1; 2,5; 5; 10 với EtOH và DPPH. Sau đó, để yên hỗn hợp trong 30 phút ở nhiệt độ phịng trong bóng tối.Cuối cùng, đo độ hấp thụ ở bước sóng 519 nm.
31
Quy trình đo các mẫu cao trích