2.1. HOÁ CHẤT VÀ PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
2.1.1. Nguyên liệu và hoá chất
- Zerumbone chuẩn của hãng Sigma-Aldrich, các hoá chất dùng thực hiện phản ứng chuyển hố của hãng Merck hoặc Sigma-Aldrich có độ tinh khiết PA.
- Các dung môi cho phản ứng mua của hãng Merck, các dung môi chạy cột sử dụng dung môi công nghiệp đã làm khô và cất lại.
- Sắc ký cột dùng silica gel kích thƣớc hạt 40-63 μm cho cột thƣờng, 15-20 μm và 25-40 μm cho cột nhanh.
- SKBM: Sử dụng bản mỏng silica gel tráng sẵn trên bản nhôm của hãng Merck. - Sắc ký cột và SKBM pha đảo sử dụng chất hấp phụ là Rp18 của hãng Sigma- Aldrich.
2.1.2. Các thiết bị dùng cho nghiên cứu
- Áp dụng thiết bị tự chế có hiệu ứng muối, có bẫy dung mơi để điều chế tinh dầu.
- Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân một chiều và hai chiều: 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT
135, DEPT 90, H-H-COSY, HMBC, HSQC, NOESY đƣợc đo trên máy Bruker AVANCE 500 tại Viện Hoá học - Viện HLKH&CN Việt Nam.
- Phổ EI-MS đƣợc đo trên máy AMD 70eV tại Viện Hoá học - Viện HLKH&CN Việt Nam.
- Phổ ESI-MS AGILENT 1100 LC-MSD Trap tại Viện Hoá học - Viện HLKH&CN Việt Nam.
- Phổ hồng ngoại đƣợc đo trên máy Nicolet Impact 410 (Mỹ) tại Viện Hoá học - Viện HLKH&CN Việt Nam.
- Điểm nóng chảy đo trên máy Bamstead Electrothermal 9100 tại Trung tâm Nhiệt đới Việt Nga.
- Phổ khối phân giải cao (HR-MS) đƣợc đo trên máy FTICR MS Varian tại Viện Hoá học - Viện HLKH&CN Việt Nam.
2.2. CÁC PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM
- Sử dụng các phƣơng pháp truyền thống nhƣ cất cuốn hơi nƣớc, chiết bằng dung môi để chiết tách tinh dầu; dùng phƣơng pháp chiết chọn lọc theo độ phân cực của dung môi để chiết zerumbone trong cây đã chọn và phƣơng pháp SCK để phân lập zerumbone.
- Sử dụng phƣơng pháp GC-MS để phân tích thành phần tinh dầu của các cây thuốc nghiên cứu. Sử dụng phƣơng pháp HPLC-MS để xác định hàm lƣợng của zerumbone thu đƣợc.
- Sử dụng các phƣơng pháp tổng hợp hữu cơ cơ bản để chuyển hoá zerumbone kết hợp với các phƣơng pháp SKLM, SKC, SKC nhanh để tinh chế làm sạch các sản phẩm chuyển hoá.
- Sử dụng các phƣơng pháp vật lý hiện đại nhƣ phổ IR, 1D-NMR, 2D-NMR và phổ MS cũng nhƣ HR-MS để xác định cấu trúc các hợp chất chiết tách và tổng hợp đƣợc.
- Các phép thử sinh học để định hƣớng (bioassay guided) cho việc nghiên cứu các hoạt chất sinh học: hoạt tính kháng VSVKĐ tiến hành theo phƣơng pháp hiện đại Vanden Bergher và Vlietlink (1994); hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ đƣợc tiến hành thử theo phƣơng pháp đang áp dụng tại Viện nghiên cứu ung thƣ quốc gia của Mĩ (NCI).
2.3. PHÂN TÍCH TINH DẦU VÀ ZERUMBONE TRONG CỦ CỦA 4 CÂY THUỐC THUỘC HỌ GỪNG THUỐC THUỘC HỌ GỪNG
2.3.1. Lý lịch mẫu