Bacillus
Nghiên cứu môi trường cơ bản, tỷ lệ giống
Các môi trường cơ bản (Atlas, 2010): LB (Luria- Bertani), LB* (LB
với peptone thay cho tryptone), PCB (Plate count broth), PCB* (PCB với peptone thay cho tryptone), NB (Nutrient broth). Các môi trường nghiên cứu
được điều chỉnh pH bằng hai dung dịch NaOH 1M và HCl 1M, được vô trùng ở 121oC, 1atm, 20 phút.
Phương pháp xác định pH ni cấy thích hợp
Nội dung tiến hành: Tiến hành nuôi cấy chủng vi khuẩn trên môi trường NA ở 37oC, trong 24 giờ với tỷ lệ cấp giống 2%, tốc độ lắc 120 vịng/phút trên 5 mơ hình pH mơi trường khác nhau: 6; 6,5; 7; 7,5; 8.
Ở các môi trường pH khác nhau xác định mật độ tế bào theo phương pháp định lượng. Từ đó xác định được pH thích hợp cho thu nhận sinh khối vi khuẩn.
Phương pháp xác định nhiệt độ ni cấy thích hợp
Điều kiện nhiệt độ phù hợp là yếu tố kích thích sinh trưởng và phát triển của các vi sinh vật. Ở các nhiệt độ khác nhau thì vi sinh vật sẽ sinh trưởng và phát triển khác nhau.
Nội dung tiến hành:
Tiến hành nuôi cấy chủng vi khuẩn trên môi trường NA, ở cùng điều kiện pH, thời gian, nuôi cấy là 24 giờ cùng với 2% lượng giống cấp, tốc độ lắc 120 vịng/phút nhưng khác nhau về nhiệt độ ni cấy 30, 35, 37, 40, 42oC thì sẽ thu được khối lượng vi khuẩn khác nhau. Ở nhiệt độ khác nhau xác định mật độ tế bào theo phương pháp định lượng. Từ đó, xác định được nhiệt độ ni cấy thích hợp cho vi khuẩn Bacillus.
Phương pháp xác định thời gian ni cấy thích hợp Nội dung tiến hành:
34
Nghiên cứu thời gian phát triển của vi khuẩn Bacillus trên các mơ hình: 16, 24, 32, 40, 48, 54, 60, 66, 72, 86, 90, 96 giờ. Tại mỗi thời điểm nuôi cấy xác định mật độ tế bào. Từ đó, xác định được thời gian thích hợp trong q trình ni cấy cho vi khuẩn Bacillus.
Phương pháp xác định tốc độ lắc ni cấy thích hợp
Tốc đổ lắc thể hiện vi khuẩn đó có nhu cầu oxy cao hay thấp, mỗi chủng vi khuẩn sẽ thích nghi với tốc độ lắc riêng.
Cách tiến hành:
Cấy chủng vi khuẩn trên môi trường NA, ở cùng điều kiện pH, thời gian, nuôi cấy là 24 giờ cùng với 2% lượng giống cấp, nhiệt độ 37oC trên các mơ hình tốc độ lắc khác nhau: 0; 50; 80; 100; 120; 150; 200 vòng/phút. Tại mỗi thời điểm nuôi cấy xác định mật độ tế bào. Từ đó, xác định được tốc độ lắc thích hợp trong q trình ni cấy cho vi khuẩn Bacillus.