D a vào k t qu c a q trình kh o sát có th th y khi t ngăth iăgianăđ ng hóa
thìăkíchăth c h t gi m m nh (t 4,5 m xu ng còn 2,1 m),ăđ ng th iăđ đ ngăđ u c a h t ng. Trongăđó,ăh phơnătánăđ tăkíchăth c nh nh t t i th iăgianăđ ng hóa 45 phút v i giá tr median là 2,157 m. Tuyănhiên,ăkhiăt ngăth iăgianăđ ngăhóaălênăđ n 60 phút, các h t liên t c va ch m có th d năđ n hi năt ng k t chùm, d năđ n kích
th c h t cóăxuăh ng t ngătr l i. Ngồi ra, ho t ch tăc ngăcóăth b th t thốt do
tácăđ ng c aăqătrìnhăđ ng hóa trong th iăgianădƠi.ăDoăđó,ăđ tài ti n hành l a ch n ki mătraăhƠmăl ng xanthone t ngăđ i v i m uăđ ng hóa cóăkíchăth c nh nh t là 45 phút, k t qu cho th y 98,4% ho t ch t v n còn trong s n ph m. Nh ăv y, ch n
th iăgiană45ăphútăđ ti n hành các nghiên c u ti p theo. 3.2.2.3. nh h ng c a t căđ đ ng hóa
H phân tán ti p t căđ c kh o sát t i các t căđ đ ngăhóaăkhácănhauăđ đánhăgiáă
kh n ngăt o l c c t xé h t vƠ tácăđ ngăđ năkíchăth c c a h , t 11.000ărpmăđ n
54
Hình 3.19. nhăh ng c a t căđ đ ng hóaăđ năkíchăth c HPT ch ph m
Qătrìnhăt ngăt căđ đ ng hóa có nhăh ngăđ n vi c gi măkíchăth căvƠăt ngă
đ đ ngăđ u c a h phân tán. t căđ 11.000ărpm,ăkíchăth c h t v n cịn khá l n
và n m trong kho ng 2,6 m. Khi nâng t căđ lên 12.000 rpm, n ngăl ng cung c p
cho h giaăt ngăgiúpăpháăv các h t to v kíchăth c nh , nh đóăkíchăth c median
c a h t gi m xu ng còn 2,1 m. Ti p t căt ngăt căđ đ ngăhóa,ăkíchăth c h phân tán ch ph m khơng có s thayăđ iăđángăk . ng th i,ămáyăđ ng hóa b tăđ u có hi n
t ng rung m nh làm nhăh ngăđ n thi t b vƠăkíchăth c c a h . Doăđó,ăt căđ
đ ng hóa 12.000ăvịng/phútăđ c l a ch nălƠmăđi u ki n kh o sát ti p theo. 3.2.2.4. Th nghi măgiaăt ng n ngăđ ch ph m
giaăt ngăhi u qu s d ng ch ph m khi ng d ng vào các s n ph m th c t , n ngăđ b t ch ph m c a h phơnătánăđ c nâng l năl tălênăđ n 10 g/L so v i kh o
sátăbanăđ u (2 g/L). Ngo iăquanăvƠăkíchăth c h phân tánăđ c th hi n trong B ng
3.3. Theoăquáătrìnhăt ngăn ngăđ ch ph m, h huy n phù t màu nâu ánh vàng nhanh
chóng chuy n sang màu nâu s m,ăđ đ căt ngăm nh.ă i măđ c bi t là khi n ngăđ
ch ph m càng cao thì kích th c trung bình c a h cóăxuăh ng gi m xu ng,ăđi n
55
B ng 3.3. Ngo iăquanăvƠăkíchăth c HPT ch ph m các n ngăđ khác nhau
N ngăđ ch ph m 2 g/L 4 g/L 5 g/L 10 g/L Ngo i quan Kích th c Median (m) 2,157 2,160 2,131 1,486 Mean (m) 2,610 2,574 2,631 2,146
K t qu trên đ c gi i thích lƠădoăđ i v i h phân tán ch ph m khi n ngăđ
loãng, l căt ngătácăđ c t xé h tăch aăđ đ cân b ng gi aăđ nh t pha phân tán so v iăđ nh t c a c h huy n phù. Khi n ngăđ ch ph măđ c nâng lên d năđ n hàm
l ng ch t ho tăđ ng b m t trong cùng m t th tíchăt ngăm nh (t 1 g/L t ngălênă5 g/L), l căt ngătácăgi a các c u t và gi a c u t v i môiătr ng phân tán thayăđ i, s phân b c a chúng trong không gian h c ngătr nên ch t ch h n.ă i u này d n
đ năđ nh t c a h t ng, quá trình c t xé h t tr nên d dƠngăh n.ăKhiăđ tăđ c đ
nh tăt ngăđ i, h phơnătánăđ t tr ng thái cân b ng,ădoăđóăcác h t ti u phân trong h có kh n ngăt l ăl ng vƠ c n tr s sa l ng theo th i gian.
Nh ăv y, tùy vào b n ch t c a pha phân tán mà kh n ngăgi măkíchăth c h t
khiăgiaăt ngăhƠmăl ng ho t ch t trong h s khác nhau. K t qu nghiên c u cho th y
h phân tán ch ph m lá dó b u cóăxuăh ng d đ tăkíchăth c nh h năkhi t ngăn ng
đ lên đ n 10 g/L,ăđ nhăh ng nƠy kh thi trong các ng d ng quy mô l n. Tuy nhiên,
n ngăđ quá cao h phân tán có ngo iăquanăt ngăđ i s m,ădoăđóăc n l a ch n n ng
đ thích h p khi ph i ch vào các s n ph m m ph m. Trong ph m vi lu năv n,ăn ng
56
3.2.2.5. K t lu n
Trong các kh o sát trên, h huy n phù ch ph m lá dó b uăđ c t o thành b ng
ph ngăphápăđ ng hóa t căđ cao v i s h tr c a lecithin.ăCácăđi u ki n t o thành h huy năphùănh ăsauμ
− Máyăđ ng hóa FSH-2Aă(đ ngăkínhărotorμă8ămm,ăđ ng kính stator: 11 mm)
− Th tích th c hi n: 50 mL
− N ngăđ ch ph m đ c s d ng: 2 g/L
− T l cao chi t và lecithin: 1:0,5 g/g
− T căđ đ ng hóa: 12.000 rpm
− Th iăgianăđ ng hóa: 45 phút.
H phân tán thuăđ c sau quá trình th c hi n l p l i nhi u l n s s d ng cho các nghiên c uăgiaiăđo n sau.
3.2.3. H phân tán mangiferin
soăsánhăvƠăđánhăgiáătínhăch t c a các h phơnătánăkhiăđiăt các ngu n nguyên li u cóăhƠmăl ng mangiferin khácănhau,ăđ tài ti p t c ti n hành t o h phân tán mangiferin th tr ng d aătrênăcácăđi u ki n kh oăsátăthuăđ c t quá trình t o h huy n phù ch ph m lá dó b u cùng n ngăđ mangiferină(t ngă ng 0,314 g/L).
Qătrìnhăđ ngăhóaăđ c th c hi n v i t l gi a mangiferin tinh khi t: lecithin là 1:0,5 (g/g), t căđ đ ng hóa 12.000 rpm trong th i gian 45 phút. Tuy nhiên, theo th i gian ti n hƠnhăđ ng hóa, h phơnătánămangiferinăthuăđ c d n chy n sang màu nâu s m, hoàn toàn khác bi t so v i màu s căbanăđ u c a nguyên li u. Nh năđnh y u t th i gian có nhăh ng l năđ n tính ch t c a h phơnătán,ăđ tài ti n hành kh o sát
qătrìnhăđ ng hóa các th i gian khác nhau, kéo dài t 15 ậ 45 phút.
3.2.3.1. nhăh ng c a th iăgianăđ ng hóa
Ngo i quan h phân tán mangiferin th tr ng có màu s căthayăđ i rõ r t so v i màu vàng nh t banăđ u. Khi th c hi năqătrìnhăđ ng hóa v i s có m t c a lecithin
đ h tr kh n ngăphơnătán,ăh phân tán chuy n d n sang màu vàng sáng. Ti p t c th iăgianăđ ngăhóaălênăđ n 45 phút, h th hi n s c màu nâu cam.
57
B ng 3.4. nhăh ng c a th iăgianăđ ngăhóaăđ n tính ch t HPT mangiferin
Th i gian Banăđ u 15 phút 30 phút 45 phút
Ngo i quan h phân tán Kích th c Median (m) - 2,490 2,519 1,348 Mean (m) - 2,825 2,842 1,541 HƠmăl ng xanthone t ng (g/L) - 313,98 307,96 305,19
K t qu th hi n trong B ng 3.4 cho th y th iăgianăđ ng hóa t ng,ăkíchăth c h gi m m nh t 2,5 mm (15 phút) còn 1,3 mm (45 phút), tuy nhiên hàm l ng xanthone th t thoát theo th iăgianăc ngăt ngăd n.ăDoăđó,ăđ đ m b o v ngo i quan
c ngănh ăgi m s th t thoát ho t ch t, l a ch n th i gian t iă uălƠă15ăphút.
3.2.3.2. Th nghi măgiaăt ng n ngăđ mangiferin
Trong nghiên c uănƠy,ăđ tài ti p t cănơngăhƠmăl ng b t mangiferin trong h phân tán lên g p 2 l n (0,628 g/L) so v iăbanăđ uă(0,314ăg/L)ăđ đánhăgiáă nh h ng c a n ngăđ mangiferinăđ năkíchăth c h phân tán. Trongăđi u ki năđ ng hóa v i s h tr c a lecithin t l 1:0,5 (g/g), th i gian và t căđ l năl t là 15 phút và 12.000 rpm, h thuăđ căcóămƠuănơuăánhăvƠng,ăđ đ c cao. Tuy nhiên, sau qătrìnhăđ ng hóa, mangiferin trong h b tăđ u có hi năt ng l ng xu ngăđáyăbình. So sánh v i cao chi t và ch ph m t lá dó b u có th th y bên c nh mangiferin thì chúng còn ch a thành ph n khác nh ăcác ho t ch t v iăđ tan khác nhau, gum, nh a, các polymer t nhiên có trong lá cây,ầ mangăđ n kh n ngăh tr h phân tán t tăh n,ădoăđóăh
huy n phù d đ aăv kíchăth c nh c ngănh ăkh n ngă năđnh cao. Trongăkhiăđó,
h phân tán mangiferin tinh khi t do khơng có s h tr c a các thành ph n polymer t nhiên nên cóăđ b n th p.
58
kh c ph c tình tr ngănƠy,ăđ tài ti năhƠnhăgiaăt ngăs h tr c a các ch t tr phân tán b ngăcáchăthayăđ i t l gi aăhƠmăl ng cao chi t và lecithin. D a vào k t
qu mơ t trong B ng 3.5 có th th y vi căgiaăt ngăhƠmăl ngălecithinăđưăcóătácăđ ng t tăđ năđ b n c a h phân tán mangiferin.
B ng 3.5. nhăh ng gi a t l mangiferin: lecithină(g/g)ăđ n tính ch t HPT mangiferin
T l mangiferin và lecithin (g/g) 1:0,5 1:2 1:5 1:10 Ngo i quan Kích th c Median (m) - - 3,178 3,272 Mean (m) - - 4,432 3,780 b n c a h Sau khiăđ ng hóa, h có hi nă t ng sa l ng Sau 1h, h có hi n t ng sa l ng Sau 1 ngày, h có hi n t ng sa l ng Sau 3 ngày, h có hi năt ng sa l ng
Khi l ng ch t ho tăđ ng b m t trong h th p,ăch aăđ đ gi m s căc ngăb
m t xu ng t i thi u vƠ hi u qu bao b c mangiferin cịn th p,ădoăđóănhanhăchóngăx y
ra s k t t gi a các h t trong h phân tán.ăHƠmăl ng lecithin cao lƠmăt ngăđ nh t
vƠtácăđ ngăđ n l c xé gi a các l p ch t l ngăc ngănh ăgiaăt ngăkh n ngătr phân tán ho t ch t trong h . Tuy nhiên, b n ch t h phân tán mangiferin không b n nên theo th i gian h v năcóăxuăh ng k t chùm và sa l ng.
Trong ph m vi lu năv n, l a ch n h phân tán mangiferin tinh khi t n ngăđ
0,314 g/L v iăđ năđnh t t nh t đ đ ng nh t v m tăhƠmăl ng gi a các h phân
59
3.2.3.3. K t lu n
Trong các kh o sát trên, h huy năphùămangiferinăđ c t o thành b ngăph ngă phápăđ ng hóa t căđ cao v i ho tăđ ng b m tălecithin.ăCácăđi u ki n t o thành h huy năphùănh ăsauμ
− Máyăđ ng hóa FSH-2Aă(đ ngăkínhărotorμă8ămm,ăđ ng kính stator: 11 mm)
− Th tích th c hi n: 50 mL
− N ngăđ ch ph m đ c s d ng: 0,314 g/L
− T l cao chi t và lecithin: 1:0,5 g/g
− T căđ đ ng hóa: 12.000 rpm
− Th iăgianăđ ng hóa: 15 phút
i u ki n nƠyăđ c th c hi n l p l i nhi u l năthuăđ c h phân tán s d ng cho các nghiên c uăgiaiăđo n sau.
3.3. ÁNH GIÁ TÍNH CH T CÁC H PHÂN TÁN
Sau quá trình kh o sát các y u t nhăh ngăđ năqătrìnhăđ ng hóa, các s n ph măthuăđ c bao g m:
− H phân tán cao chi t lá dó b u 2 g/L
− H phân tán ch ph m lá dó b u 2 g/L
− H phân tán mangiferin 0,314 g/L
Trong ph n này s t pătrungăđánhăgiáătính ch t,ăđ b năc ngănh ăđ ng h c q trình hịa tan và ho t tính sinh h c c a 3 lo i s n ph m trên.
3.3.1. Tính ch tăc ăb n c a các h phân tán 3.3.1.1. Ngo iăquanăvƠăhƠmăl ng ho t ch t 3.3.1.1. Ngo iăquanăvƠăhƠmăl ng ho t ch t
Các thơng s tính ch t c a ba h phơnătánăđ c trình bày trong B ng 3.6. Quan
sát ngo i quan các s n ph măsauăkhiăđ c t o thành nh n th y h phân tán cao chi t lá dó b uăcóămƠuăvƠng,ăh iăđ c.ăTrongăkhiăđó, h phân tán ch ph m có màu nâu và trong su t, còn h phơnătánămangiferinăthuăđ c cho ngo i quan màu vàng sáng,
60
h : l ngălecithinăcƠngăcaoăthìăđ đ căt ng.ăC ba h phơnătánăđ u không xu t hi n s sa l ng sau khi quá trình đ ng hóa.
B ng 3.6. Ngo i quanăvƠăhƠmăl ng các HPT Tính ch t HPT cao chi t HPT ch ph m HPT mangiferin HƠmăl ng (g/L) 2 2 0,314 Ngo i quan Màu s c (L, C, h) Nâu ánh vàng L = 37,38; C = 4,73; h = 108,08 Nâu L = 32,46; C = 16,17; h = 64,30 Vàng L = 40,26; C = 12,35; h = 120,11 đ c c nh Trong su t Trong su t Kích th c Median (m) 0,283 2,181 2,490 Mean (m) 0,727 2,549 2,825 HƠmăl ng polyphenol (mg/L) (xác đ nh trong s n ph m) 878,7 1697,9 338,7 HƠmăl ng xanthone (mg/L) (xác đ nh trong s n ph m) 441,1 841,9 314,0 HƠmăl ng mangiferin (mg/L) (xác đ nh trong s n ph m) 177,7 391,7 308,5 cùng n ngăđ phơnătánă2ăg/L,ăhƠmăl ng polyphenol, xanthone và mangiferin c a h huy n phù ch ph m lá dó b u thuăđ c cao g p t 1,9 ậ 2,2 l n so v i h huy n phù cao chi t. ng th i,ăđ i v i h phân tán mangiferin tinh khi t thì hàm
61
nhau. Quá trình đoăd a trên hƠmăl ng polyphenol và xanthone t ngăđ c x lý m u b ng ph n ng t o ph căđ cătr ngăvƠăxácăđ nh thông qua ph ngăphápăquang ph h p thu nên có sai s v i k t qu HPLC. Tuy nhiên, cácăph ngăphápănƠyănhanh,ă
thu n ti n, k t qu không quá khác bi t nên v n có th s d ng khi so sánh trong các kh o sát s ăb . Vi c ki m tra l i các k t qu b ngăcácăph ngăphápăcóăđ chính xác cao đ c th c hi n song song trongăcácăgiaiăđo n nghiên c u ti p theo.
3.3.1.2. Phân b kíchăth c
K t qu phân tích b ngăph ngăphápătánăx laser cho th y trong 3 h phân tán, cao chi t lá dó b u d đ aăv kíchăth c nh nh t v i giá tr trung bình n măd i 300
nm.ă ng th i,ăđ ng phân b c a h huy n phù cao chi tăcóăhìnhăchngănh ngăv n cịn hi n di n ph năđiăn măvùngăkíchăth c l n m c dù không nhi u, nguyên nhân là do quá trình t o h phơnătánăch aăđ ngăđ u.ăKíchăth c h phân tán ch ph m và mangiferin có giá tr caoăh n,ăn m trong kho ng 2,0 ậ 2,5 m. Sai bi t gi a kích
th c mean và median trong h th p, đ ng phân b không xu t hi n ph năđuôiătr i dài th hi n h có phân b kíchăth c t tăh năsoăv i h phân tán cao chi t.
B ng 3.7. Phân b kích th c h t c a các HPT HPT cao chi t lá dó b u HPT ch ph m lá dó b u HPT mangiferin
62
3.3.1.3. Hình thái c a các h phân tán
Các h phơnătánăđ c ki m tra hình thái vƠ c u trúc b ngăph ngăpháp kính hi năviăđi n t quét qua (SEM).
Hình 3.20. nh ch p SEM c a các h phân tán: (a) ậ T cao chi t, (b) ậ T ch ph m
K t qu cho th yăđ i v i h phân tán cao chi t lá dó b u, các h t có d ng hình
trịn,ăkíchăth c nh ,ăkhơngăđ u và tr i dài t kho ng 100 ậ 300 nm. Trên b m t các h t có l p bao ph dày và gi a các h t x y ra hi năt ng k t dính thành chùm. Nguyên nhân có th là do nh ng thành ph n ph còn l i trong cao chi tănh ăgum, nh a,ăầă c ngănh ălecithină d ng paste d o nên d b k tădínhăkhiăđ c làm khơ trên b m t
đo.ă
Trongăkhiăđó,ăh phân tán ch ph m lá dó b uăthuăđ c h t có hình d ng khác nhau, c uătrúcăđaădi n v i kích th căkhơngăđ ngăđ u (n m trong kho ng t 1 ậ 2
m) và l năh năsoăv iăkíchăth c h phân tán cao chi t. Bên ngồi h t có l p vân m th hi n l p solvate hóa bao quanh. H có x y ra hi năt ng k t chùmănh ngăkhôngă
nhi uănh ăh phân tán cao chi t.ă i u này có th cho th y q trình h p ph - r a gi i không ch nơngăcaoăhƠmăl ng ho t ch t mà còn h tr lo i b b t m t ph n t p ch t trong cao chi t.ăNgoƠiăra,ăl ng lecithin s d ng trong h phân tán ch ph m (1 g/L) th păh năh phân tán cao chi tă(2,5ăg/L)ănênăc ngăđưăgi m b t hi n t ng k t dính sau khi làm khơ.
63
3.3.2. b n c a các h phân tán
Ti năhƠnhăl uătr các m u phân tán trong 2 tu n nh măđánhăgiáăđ b n v ngo i
quan,ăkíchăth căvƠăhƠmăl ng c a các h theo th i gian t iăhaiăđi u ki n: nhi tăđ
phòng và m (45 oC). D a vào k t qu này có th d đoánăs bi năđ i c a các h phân tán, t đóăxácăđnh th iăgianăvƠăđi u ki năl uătr m u cho phép.
3.3.2.1. b n màu s c
Ngo i quan c a h cu i quá trình kh oăsátăđ c th hi n trong B ng 3.8.
B ng 3.8. Ngo i quan c a các HPT sau 2 tu n t i: (a) Nhi tăđ th ng và (b) 45 oC
Banăđ u
Nhi tăđ th ng Nhi tăđ t m
Sau 1 tu n Sau 2 tu n Sau 1 tu n Sau 2 tu n
H phân tán cao chi t lá dó b u
H phân tán ch ph m lá dó b u
H phân tán mangiferin
Nhìn chung, nhi tăđ th ng thì ngo i quan c a các h khơng có s thayăđ i rõ r t so v iăbanăđ u. i v iăđi u ki n nhi tăđ t m, màu s c c a các h có xu
64