(Trung tâm Sinh học Thực nghiệm, 2013 - 2014)
Thời gian và nồng độ xử lý (NaOCl) Tỷ lệ mẫu chết (%) Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu sống (%) NT HV NT HV NT HV 3% NaOCl trong 5 phút 3,6 2,2 80,0 80,6 16,4 17,2 3% NaOCl trong 10 phút 9,0 6,0 57,0 58,5 34,0 33,5 3% NaOCl trong 15 phút 11,9 7,3 25,1 29,2 63,0 63,5 3% NaOCl trong 20 phút 31,4 31,5 16,2 15,2 52,4 53,3 3% NaOCl trong 25 phút 67,0 61,3 11,4 12,3 21,6 26,4
Trong phạm vi từ 5 đến 15 phút, tỷ lệ mẫu sống tăng theo chiều thuận, sau đó giảm nhẹ ở ngưỡng 20 phút và khi tăng thời gian khử trùng lên 25 phút, tỷ lệ mẫu sống giảm xuống khá rõ (21,6 - 26,4%) trong lúc tỷ lệ mẫu chết lại có xu hướng tăng lên (61,3 - 67%). Kết quả này cho thấy NaOCl là chất khử trùng chưa có hiệu quả đối với mẫu lan Nghệ tâm và Hạc vỹ đưa vào ni cấy in vitro, và cũng chính vì vậy đề tài tiếp tục thử nghiệm với loại chất khử trùng khác NaOCl kết hợp với chất kháng sinh cefotaxime.
3.2.1.2 Ảnh hưởng của chất kháng sinh cefotaxime (cef) và 3% NaOCl đến khả năng sống và vô trùng của mẫu cấy
Kết quả thể hiện ở bảng 3.8 cho thấy, việc bổ sung cefotaxime vào môi trường ni cấy có tác dụng cải thiện rõ đến tỷ lệ mẫu sống và gần như không gây ảnh hưởng nhiều đến sức sống của mẫu cấy. Sau 6 tuần theo dõi, tỷ lệ mẫu sống đạt cao nhất (79,9% với lan Nghệ tâm; 86% với lan Hạc vỹ) ở nồng độ 3% NaOCl (15 phút) và 1‰ cefotaxime, trong khi các công thức đối chứng chỉ đạt 63,1 - 63,4%. Như vậy, có thể thấy kháng sinh có tác dụng khử trùng rất tốt đối với hai loài lan Nghệ tâm và Hạc vỹ.
Bảng 3.8 Ảnh hưởng của chất kháng sinh cefotaxime (cef) và 3% NaOCl đến khả năng sống và vô trùng của mẫu cấy
(Trung tâm Sinh học Thực nghiệm, 2013 - 2014)
Thời gian và nồng độ xử lý (‰ cefotaxime) Tỷ lệ mẫu chết (%) Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu sống (%) NT HV NT HV NT HV CT1 (3% NaOCl trong 15 phút) 11,8 7,2 25,1 29,2 63,1 63,4 CT1 + 0,5‰ cefotaxime 13,2 8,5 18,2 21,3 68,6 70,2 CT1 + 1‰ cefotaxime 14,1 10,0 6,0 4,0 79,9 86,0 CT1 + 1,5‰ cefotaxime 24,8 24,6 3,8 3,2 71,4 72,2 CT1 + 2‰ cefotaxime 38,9 37,4 2,3 2,5 58,8 60,1
Từ kết quả trên đây, đề tài đã xác định công thức khử trùng phù hợp nhất cho cả hai loài lan Nghệ tâm và Hạc vỹ là xử lý 3% NaOCl trong 15 phút với 1‰ cefotaxime.
Hình 3.7 Mẫu nảy chồi sau 6 tuần ni cấy
3.2.2 Nghiên cứu tạo vật liệu protocorm like bodies (PLBs) từ lát mỏng tế bào
nằm ngang (tTCL)
3.2.2.1 Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo PLBs từ lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL)
Lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL) được cấy lên môi trường VW + 20 g/l sucrose + 10% nước dừa + 7 g/l agar bổ sung BA từ 0,5 - 3 mg/l để khảo sát ảnh hưởng của BA lên khả năng phát sinh PLBs. Kết quả sau 6 tuần ni cấy trình bày ở bảng 3.9 cho thấy: Bổ sung BA vào mơi trường ni cấy có tác động rất tích cực tới khả năng cảm ứng tạo PLBs trực tiếp từ tTCL.
Trên môi trường VW bổ sung 1,5 mg/l BA, số PLBs hình thành đạt cao nhất (30,1 PLBs/tTCL), tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs là 52%, 28,7 PLBs/tTCL với lan Nghệ tâm, tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs là 49,2% với lan Hạc vỹ sau 6 tuần nuôi cấy, trong khi công thức đối chứng (không bổ sung BA) khơng có khả năng phát sinh hình thái sau 6 tuần nuôi cấy.
Khi tiếp tục tăng nồng độ BA từ 1,5 mg/l đến 3 mg/l, khả năng tạo PLBs giảm dần, điều này có thể do nồng độ BA cao đã gây ức chế đến sự phát sinh PLBs từ tTCL. Kết quả thấp nhất khi bổ sung nồng độ 3 mg/l BA vào môi trường với tỷ lệ
tTCL phát sinh PLBs chỉ đạt 10% với 8,5 PLBs/tTCL với lan Nghệ tâm và tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs chỉ đạt 9,1% với 7,7 PLBs/tTCL với lan Hạc vỹ.