Các kết quả nghiên cứu trên đây cho thấy: Trong giai đoạn tạo PLBs từ tTCL và tái sinh chồi từ PLBs các Cytokinin kết hợp với Auxin như BA + IBA đều có khả năng tạo PLBs từ tTCL và tái sinh chồi từ PLBs cũng như chất lượng của chồi khá
tốt. Sử dụng 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA + 30 g/l dịch nghiền bí ngơ + 1 g/l tảo
Spirulina bổ sung vào môi trường VW + 20 g/l sucrose + 10% nước dừa + 7 g/l agar
+ 1 g/l than hoạt tính + 2 g/l peptone, pH 5,5 cho tỷ lệ tạo PLBs từ tTCL và tái sinh chồi từ PLBs đạt cao nhất, chất lượng chồi tốt, kéo dài tuổi thọ của chồi trong nhân nhanh.
3.2.4 Nghiên cứu tạo cây in vitro hoàn chỉnh
Đây là giai đoạn cuối cùng của quá trình nhân giống in vitro, tạo cây con hoàn chỉnh với đầy đủ các cơ quan thân, lá, rễ, cây khỏe mạnh, có thể sống, sinh trưởng, phát triển tốt khi ra vườn ươm và vườn sản xuất.
Với mục đích tìm ra mơi trường tối ưu cho cây lan Nghệ tâm và Hạc vỹ sinh trưởng và phát triển thuận lợi, đạt tiêu chuẩn cây đưa ra vườn ươm và vườn sản xuất, chúng tôi bổ sung IBA và PAA ở các nồng độ khác nhau vào môi trường VW + 20 g/l sucrose + 10% nước dừa + 7 g/l agar + 1 g/l THT, kết quả được thể hiện ở bảng 3.14 và bảng 3.15.
3.2.4.1 Ảnh hưởng của IBA đến khả năng tạo rễ chồi lan Nghệ tâm và Hạc vỹ in
vitro
Bảng 3.14 Ảnh hưởng của IBA đến khả năng tạo rễ chồi lan Nghệ tâm và Hạc vỹ in vitro
(sau 6 tuần nuôi cấy)
Nồng độ IBA (mg/l)
Chiều cao
cây (cm) Số lá (lá) Số rễ (rễ) Chiều dài rễ (cm)
NT HV NT HV NT HV NT HV 0,0 (Đ/C) 3,50 3,52 3,00 3,00 2,50 2,50 1,12 1,14 0,5 5,30 5,38 4,20 4,50 6,20 6,00 2,13 2,24 1,0 6,50 6,80 5,30 5,40 7,30 7,00 2,87 2,80 1,5 5,00 5,72 4,08 4,10 4,90 5,10 1,92 1,86 2,0 4,60 5,35 4,00 3,90 3,70 4,10 1,26 1,24 CV (%) 3,3 3,0 4,1 3,0 3,7 3,8 3,9 3,8 LSD0,05 0,93 0,39 0,6 0,38 0,32 0,53 0,74 0,16
Số liệu bảng 3.14 cho thấy: mơi trường khơng bổ sung IBA rễ vẫn hình thành, chứng tỏ auxin nội sinh được hình thành ở chồi và di chuyển xuống dưới gốc để cảm ứng tạo rễ.
Tất cả các mơi trường có bổ sung IBA đều hình thành rễ. Tại nồng độ 1 mg/l IBA sau 6 tuần nuôi cấy cây đạt các chỉ tiêu sinh trưởng tốt nhất, chiều cao cây đạt 6,5 cm, số lá đạt 5,3 lá/cây, số rễ đạt 7,3 rễ/cây, chiều dài rễ đạt 2,87 cm với lan Nghệ tâm và chiều cao cây đạt 6,8 cm, số lá đạt 5,4 lá/cây, số rễ đạt 7 rễ/cây, chiều dài rễ đạt 2,8 cm với lan Hạc vỹ. Chất lượng rễ rất tốt, rễ dài và mập, xung quanh rễ có một lớp mơ hút ẩm dày, màu xám bạc, chóp rễ có màu xanh điều này thuận lợi cho sự phát triển của chồi và rễ ở giai đoạn vườn ươm. Tiếp tục tăng nồng độ IBA từ 1,5 - 2 mg/l, có sự ức chế kéo dài rễ và giảm số lượng rễ tạo thành. Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của Abdul Aziz Mirani et al., (2017b) khi sử dụng IBA ở nồng độ 1 mg/l cho quá trình ra rễ in vitro lan D. nobile.
3.2.4.2 Ảnh hưởng của PAA đến khả năng tạo rễ chồi lan Nghệ tâm và Hạc vỹ
in vitro
Bảng 3.15 Ảnh hưởng của PAA đến khả năng tạo rễ chồi Nghệ tâm và Hạc vỹ
(sau 6 tuần nuôi cấy)
Nồng độ PAA (mg/l)
Chiều cao
cây (cm) Số lá (lá) Số rễ (rễ) Chiều dài rễ (cm) NT HV NT HV NT HV NT HV 0,0 (Đ/C) 3,53 3,52 3,00 3,00 2,50 2,50 1,10 1,15 0,5 6,16 6,96 5,18 5,7 6,50 7,40 2,46 3,02 1,0 5,42 5,50 5,46 5,1 5,40 5,90 2,00 2,20 1,5 5,10 5,22 5,08 4,8 4,50 5,20 1,30 1,60 2,0 4,20 4,60 5,02 4,2 3,60 4,50 0,92 1,03 CV (%) 3,3 3,3 4,5 3,1 4,0 3,2 2,7 3,1 LSD0,05 0,79 0,31 0,35 0,42 0,34 0,46 0,91 0,19 Ghi chú: Môi trường nền (VW + 20 g/l sucrose + 7 g/l agar + 10% nước dừa + 1 g/l THT)