3.2.2 Nghiên cứu tạo vật liệu protocorm like bodies (PLBs) từ lát mỏng tế bào
nằm ngang (tTCL)
3.2.2.1 Ảnh hưởng của BA đến khả năng tạo PLBs từ lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL)
Lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL) được cấy lên môi trường VW + 20 g/l sucrose + 10% nước dừa + 7 g/l agar bổ sung BA từ 0,5 - 3 mg/l để khảo sát ảnh hưởng của BA lên khả năng phát sinh PLBs. Kết quả sau 6 tuần ni cấy trình bày ở bảng 3.9 cho thấy: Bổ sung BA vào mơi trường ni cấy có tác động rất tích cực tới khả năng cảm ứng tạo PLBs trực tiếp từ tTCL.
Trên môi trường VW bổ sung 1,5 mg/l BA, số PLBs hình thành đạt cao nhất (30,1 PLBs/tTCL), tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs là 52%, 28,7 PLBs/tTCL với lan Nghệ tâm, tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs là 49,2% với lan Hạc vỹ sau 6 tuần nuôi cấy, trong khi công thức đối chứng (không bổ sung BA) khơng có khả năng phát sinh hình thái sau 6 tuần nuôi cấy.
Khi tiếp tục tăng nồng độ BA từ 1,5 mg/l đến 3 mg/l, khả năng tạo PLBs giảm dần, điều này có thể do nồng độ BA cao đã gây ức chế đến sự phát sinh PLBs từ tTCL. Kết quả thấp nhất khi bổ sung nồng độ 3 mg/l BA vào môi trường với tỷ lệ
tTCL phát sinh PLBs chỉ đạt 10% với 8,5 PLBs/tTCL với lan Nghệ tâm và tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs chỉ đạt 9,1% với 7,7 PLBs/tTCL với lan Hạc vỹ.
Bảng 3.9 Ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh PLBs từ lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL) bào nằm ngang (tTCL)
(sau 6 tuần nuôi cấy)
Nồng độ BA (mg/l) Tỷ lệ mẫu tạo PLBs (%) Số PLBs/tTCL NT HV NT HV 0 (Đ/C) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,5 8,2 8,04 10,40 10,40 1,0 21,0 23,10 21,60 21,00 1,5 52,0 49,20 30,10 28,70 2,0 28,0 26,13 17,20 16,50 2,5 16,5 14,20 15,0 14,32 3,0 10,0 9,10 8,50 7,70 CV(%) 3,1 3,4 4,5 3,8 LSD0,05 2,61 2,95 1,15 0,21
Ghi chú: Nền môi trường (VW + 20 g/l sucrose + 7 g/l agar + 10% nước dừa)
3.2.2.2 Ảnh hưởng của tổ hợp (BA + αNAA) lên khả năng tạo PLBs từ lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL)
Lát mỏng tế bào (tTCL) được cấy lên môi trường VW + 20 g/l sucrose + 10%
nước dừa + 7 g/l agar + 1,5 mg/l BA và bổ sung αNAA với các nồng độ khác nhau (0,5 - 2 mg/l) để thăm dò khả năng phát sinh PLBs từ tTCL sau 6 tuần ni cấy trình bày ở bảng 3.10 cho thấy: Đối với loài lan Nghệ tâm việc bổ sung αNAA kết hợp BA vào môi trường đã không làm tăng tỷ lệ tTCL phát sinh PLBs cũng như số PLBs hình thành từ tTCL so với nền môi trường VW chỉ bổ sung BA.
Kết quả trình bày trên đây của chúng tơi tương tự với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thanh Tùng và cs., (2010) khi tái sinh chồi từ lát cắt mỏng tế bào loài lan
Dendrobium aduncum. Tác giả cũng đưa ra kết luận: khả năng tạo PLBs từ tTCL trên
Nguyên nhân có thể do αNAA kết hợp với BA có ảnh hưởng khơng tốt đối với q trình cảm ứng PLBs từ tTCL đối với loài lan Nghệ tâm.
Bảng 3.10 Ảnh hưởng của tổ hợp (BA + αNAA) đến khả năng tạo PLBs từ lát mỏng tế bào nằm ngang (tTCL)
(sau 6 tuần nuôi cấy)
Chất kích thích sinh trưởng (mg/l) Tỷ lệ mẫu tạo PLBs (%) Số PLBs/tTCL BA αNAA NT HV NT HV 1,5 0(Đ/C) 52, 03 30,40 30,12 17,83 1,5 0,5 38,0 49,22 21,00 28,71 1,5 1,0 31,0 38,30 19,00 20,70 1,5 1,5 21,9 19,96 12,80 12,30 1,5 2,0 16,0 14,80 7,00 7,45 CV (%) 3,1 4,3 3,3 3,6 LSD0,05 7,6 1,93 0,4 0,19
Ghi chú: Nền môi trường (VW + 20 g/l sucrose + 7 g/l agar + 10% nước dừa)
Đối với loài lan Hạc vỹ, việc bổ sung chất điều hòa sinh trưởng với nồng độ khác nhau ảnh hưởng trực tiếp đến sự hình thành PLBs từ lát cắt mỏng tế bào. Ở độ sai khác tin cậy 95%, sau 6 tuần nuôi cấy tỷ lệ mẫu tái sinh PLBs ở cơng thức có bổ sung 1,5 mg/l BA kết hợp với 0,5 mg/l αNAA là tốt nhất đạt 49,22% mẫu tạo thành PLBs và số lượng PLBs tái sinh từ lát cắt mỏng tế bào là 28,71, các PLBs to và có màu xanh, có lơng hút nhiều. Tiếp theo là cơng thức bổ sung 1,5 mg/l BA với 1 mg/l αNAA cũng cho tỉ lệ tái sinh PLBs khá cao đạt 38,30% với số lượng PLBs tái sinh từ lát cắt mỏng tế bào là 20,70. Khi tăng nồng độ αNAA vượt quá 1mg/l kết hợp với 1,5 mg/l BA, tỷ lệ mẫu tái sinh PLBs có xu hướng giảm dần, có thể do nồng độ αNAA cao đã ức chế khả năng tái sinh PLBs của mẫu, PLBs yếu và có màu vàng nhạt.
Như vậy, môi trường VW + 20 g/l sucrose + 7 g/l agar + 10% nước dừa có bổ sung 1,5 mg/l BA với 0,5 mg/l αNAA thích hợp cho sự tái sinh PLBs từ lát cắt mỏng
tế bào với lan Hạc vỹ.
Lan Nghệ tâm Lan Hạc vỹ