4.1 Kết luận
Chủng nấm Trichoderma TC25 và TC15 sinh trưởng mạnh, chỉ sau 3 ngày nuôi cấy đã phát triển đầy đĩa petri 8 cm.
Đã tiến hành tách chiết được hợp chất kháng nấm peptaibol có trong hai chủng nấm Trichoderma TC25 và TC15.
Đã tiến hành xác định cấu trúc và thành phần có trong hợp chất peptaibol bằng các phương pháp sắc ký. Trong đó, peptaibol của chủng TC25 có chứa 14 amino acid tương tự các Trichobrachin do loài Trichoderma harzianum sinh tổng hợp. Peptaibol của chủng TC15 thuộc nhóm Trichobrachin có chứa 11 amino acid chủ yếu do lồi
Trichoderma parceramosum sinh tổng hợp.
Peptaibol thô thu nhận được từ 2 chủng Trichoderma TC25 và TC15 có khả năng ức chế cao đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng thanh long.
4.2 Kiến nghị
Do thời gian thực hiện có hạn nên đề tài vẫn cịn nhiều hạn chế, sinh viên có một số kiến nghị:
Tiến hành khảo sát khả năng đối kháng của hợp chất Trichobrachin trên nhiều chủng nấm bệnh khác như Colletotrichum, Fusarium,….
Khảo sát hiệu lực ức chế của hợp chất Trichobrachin với nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng trên trái thanh long.
Khảo sát thử nghiệm bảo quản trái thanh long thương phẩm bằng chế phẩm Trichobrachin.
63
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
TÀI LIỆU THAM KHẢO
• Tài liệu tiếng việt:
1. Nguyễn Hồng Anh, 2013. Tối ưu hóa điều kiện thu nhận bào tử nấm
Trichoderma sp. nhằm định hướng tạo chế phẩm sinh học trừ nấm bệnh trên
cây trồng, Khóa luận tốt nghiệp chuyên ngành Công nghệ sinh học, Trường Đại học Bách Khoa Tp. Hồ Chí Minh.
2. Phạm Ngọc Dung và cộng sự, 2012. “Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng
Trichoderma asperellum trong phòng trừ nấm Phytophthora spp. gây bệnh trên
cây cao su”. Tạp chí bảo vệ thực vật, Bộ Nơng nghiệp và Phát triển nông thôn, số 12.
3. Bùi Xuân Đồng, 1982. Vi nấm, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội. 4. Giáo trình mơ đun (2011) “Thu hoạch và bảo quản thanh long”, Bộ nông
nghiệp và phát triển nông thôn.
5. Nguyễn Duy Long và cộng sự, 2017. Sản xuất thử nghiệm chế phẩm sinh học chứa Trichobrachin để phịng trừ một số lồi nấm bệnh gây hại trên cây trồng (giai đoạn 1), Báo cáo tóm tắt nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp cơ sở, Trung tâm ươm tạo doanh nghiệp nơng nghiệp cơng nghệ cao.
6. Nguyễn Văn Hịa và cộng sự, 2009. Nghiên cứu giải pháp phòng trừ bệnh thối rễ trên một số cây ăn quả đặc sản (cây có múi, vú sữa, sầu riêng và ổi) ở đồng bằng sông Cửu Long, Hội thảo quốc gia về cây trồng lần thứ nhất.
7. Nguyễn Thành Hiếu và cộng sự, 2014. Nghiên cứu xác định tác nhân, đặc điểm hình thái và sinh học của nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng trên cây Thanh Long (Hylocereus undatus), Hội thảo Quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam 6-7/4/2014.
8. Phan Thị Thu Hiền và cộng sự, 2014. Nghiên cứu định danh và khảo sát đặc điểm sinh học của tác nhân gây bệnh đốm trắng hại Thanh Long (Hylocereus undatus), Hội thảo Quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam 6-7/4/2014.
9. Lê Thị Huệ, 2010. Khảo sát khả năng sinh tổng hợp enzyme chitinase của một số
chủng nấm sợi thuộc giống Aspergillus, Trichoderma và ứng dụng, Luận văn thạc
sĩ sinh học, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh.
10.Vũ Triệu Mân, 2007. Giáo trình Bệnh cây chuyên khoa, Chuyên ngành Bảo vệ thực vật, Trường Đại học Nông Nghiệp I, Hà Nội. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
11.Lê Thiên Minh (2012), “Nghiên cứu ứng dụng một số chế phẩm sinh học nhằm nâng cao chất lượng và kéo dài thời gian bảo quản thanh long”.
12. Sở nông nghiệp và phát triển nơng thơn Bình Thuận, Trung tâm NCPT cây thanh long, 2008, Quy trình sản xuất thanh long theo Viet GRAP.
64
13.Le Van To, Nguyen Ngu, Nguyen D. Duc, Dang T.K. Trinh, Nguyen C. Thanh, Dang V.H. Mien, Chau N. Hai and Trinh N. Long. “Quality assurance system for
dragon fruit”, (2000).
14.Trần Thị Thanh Thuần, 2009. Nghiên cứu xử lý vỏ cà phê bằng Trichoderma viride
và Aspergillus niger để sản xuất phân bón hữu cơ bán tổng hợp, Khóa luận tốt
nghiệp chuyên ngành Công nghệ sinh học, Trường Đại học Bách Khoa Tp. Hồ Chí Minh.
15.Trần Thị Thuần, 1996. Kết quả nghiên cứu bước đầu về nấm đối kháng
Trichoderma, Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 1990 – 1995, Nxb.
Hà Nội.
• Tài liệu tiếng anh:
1. Agrios G.N, 2005. Plant pathology, 5th edition, Elsevier Academic Press: San Diego, California.
2. Baek Jong-Min, C. R. Howell, Charles M. Kenerley (1998), “The role of an extracellular chitinase from Trichoderma virens Gv29-8 in the biocontrol of
Rhizoctonia solani”, Curr Genet, Vol. 35, pp. 41-50.
3. Brukner H, Reinecke C, Kripp T. 1993. 4th International Congress of Plant Pathology, pp. 2918-2921.
4. Chen K, Yang HT, Li JS. 2007. Analysis of chemical components and antifungal activity of extraction from conidia of Trichoderma viride Ltr-2. J. Microbiol. 34: 455-458.
5. Degenkolb et al., 2008. Unraveling the efficient applications of secondary metabolites of various Trichoderma spp.
6. Dennis C, Webster J. 1971. Antagonistic properties of species-groups of Trichoderma: iii. hyphal interaction. Trans. Br. Mycol. Soc. 57: 363-369.
7. D. Ezra, O. Liarzi, T. Gat, and M. Hershcovich (2013), First Report of Internal Black Rot Caused by Neoscytalidium dimidiatum on Hylocereus undatus (Pitahaya) Fruit in Israel, Volume 97, Number 11.
8. Druzhinina S. I. et al. (2006), “The first 100 Trichoderma species characterized by monecular data”, Mycoscience, 47, pp. 55-64.
9. Dunlap CA, Bowman MJ, Schisler DA. Genomic analysis and secondary metabolite production in Bacillus amyloliquefaciens AS 43.3: a biocontrol antagonist of Fusarium head blight. Biol Control. 2013;64(2):166–175.
10.Edson et al, 2007. Peptaibols of Trichoderma, The Royal Society of Chemistry 2007.
65
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
11.Francesco Vinale, 2008. Trichoderma–plant–pathogen interactions,Soil Biology & Biochemistry: p. 1-10.
12.Fokkema, N.J., 1976. Antagonism Between Fungal Saprophytes and Pathogens on Aerial Plant Surfaces. In: Microbiological of Aerial Plant Surfaces, Dickinson C.H. and T.F. Preece (Eds.). Academic Press, London, pp: 486-506.
13.Gary E. Harman, C. P. Kubicek, 2005. Trichoderma And Gliocladium:
Enzymes, Biological Control and commercial applications, Volume 2, This
edition published in the Taylor & Francis e-Library. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
14.Gary J. Samuels, 2004. Trichoderma aguide to identification and biology, United States Department of Agriculture Research Service Systematic Botany and Mycology Laboratory 304, B-011A Beltsville, MD 20705-2350, USA. 15.Howell C. R. (2002), “Mechanisms employed by Trichoderma spp. in the
biological control of plant diseases: the history and evolution of current concepts”, Plant Diseases, 87(1), pp. 4-10.
16.Jamil Shafi, Hui Tian & Mingshan Ji, 2017.Bacillus Species as versatile weapons for plant pathogens: a review. Journal of Biotechnology & Biotechnological Equipment Volume 31.
17.Juliana F. de S. Daniel* and Edson Rodrigues Filho, 2007. Peptaibols of Trichoderma.
18.Kamala T. and S. Indira, 2011. Evaluation of indigenous Trichoderma isolates
from Manipur as biocontrol agent against Pythium aphanidermatum on common beans. 3 Biotech, 1(4): p. 217-225.
19.Kandasamy Saravanakumar, 2017. Effect of Trichoderma harzianum on maize rhizosphere microbiome and biocontrol of Fusarium Stalk rot.
20.Lau, C.Y, Othman, F., and Eng, L., “The effect of heat treatment, different packaging methods storage temperatures on shelf life of Dragon fruits (Hylocereus spp.)”, P1-16.
21.Li GH, Yang ZS, Zhao PJ, Zheng X, Luo SL, Sun R, et al. 2011. Three new acorane sesquiterpenes from Trichoderma sp. Ymf1.02647. Phytochem. Lett. 4: 86-88.
22.Nerd, A., GUT MAN, F&MiZRAHI, Y., (1999), “Ripenting and postharvers behaviour of fruits of two hylocereus species (Cactaceae)”, Postharvest
Biology and Technology 17, pp. 39-45.
23. Parisa rahimi Tamandegani, Dous Tmorad Zafari, Tamas Marik, (2016) “Peptaibol profiles of Iranian Trichoderma isolates”, Acta Biologica
Hungarica 67, pp. 431–441.
66
24.Prasun K. and R. Kanthadai (1997), “Effect of temperature an ortagonistic and biocontrol potential of Trichoderma spp. on Scerotium rolfsii”, Mycopathology, 139, pp. 151-155.
25.Radhakrishnan R, Hashem A, Abd Allah E., 2017. Bacillus: A Biological Tool for Crop Improvement through Bio-Molecular Changes in Adverse
Environments. Front Physiol., 8: 667.
26.Raimo Mikkola, Maria A. Andersson, László Kredics, Pavel A. Grigoriev, Nina Sundell, Mirja S. Salkinoja-Salonen, 2012., 20-Residue and 11-residue peptaibols from the fungus Trichoderma longibrachiatum are synergistic in forming Na+/K+- permeable channels and adverse action towards mammalian cells.
27.Roiger D. J, Jeffers S. N., Caldwell R. W. (1991), “Occurrence of Trichoderma species in apple orchard and wooland soil”, Soil. Biol. Biochems, 23, pp. 353-359. 28.Ruiz N , Wielgosz-Collin G , Poirier L , Grovel O , Petit KE , Mohamed,
Benkada M , du Pont TR , Bissett J , Vérité P , Barnathan G , Pouchus YF., 2007. New Trichobrachins, 11-residue peptaibols from a marine strain of Trichoderma longibrachiatum.
29. Samuels G. J. (2000), “Trichoderma systematic, the sexual state and ecology”,
Phytopathology, 96, pp. 195-206.
30.Stoppacher N, Kluger B, Zeilinger S, Krska R, Schuhmacher R. 2010. Identification and profiling of volatile metabolites of the biocontrol fungus Trichoderma atroviride by Hs-SpmeGc-Ms. J. Microbiol. Methods 81: 187-193. 31.Sun CY, Pan J, Chen XL. 2002. Screen of biocontrol Trichoderma spp
inhibiting Pseudomonas solanacearum 3 of ginger and its mechanism. J. Shandong Univ. 37: 373-376.
32. Susanne Zeilinger and Markus Omann, 2007. Trichoderma Biocontrol: Signal. 33.Raimo Mikkola, Maria A. Andersson, László Kredics, Pavel A. Grigoriev, Nina
Sundell, Mirja S. Salkinoja-Salonen, 2012., 20-Residue and 11-residue peptaibols from the fungus Trichoderma longibrachiatum are synergistic in forming Na+/K+- permeable channels and adverse action towards mammalian cells.
34.Vinale F, Manganiello G, Nigro M, Mazzei P, Piccolo A, Pascale A, Ruocco M, Marra R, Lombardi N, Lanzuise S, Varlese R, Cavallo P, Lorito M, Woo SL., 2014. A Novel Fungal Metabolite with Beneficial Properties for Agricultural Applications. 2014 Jul; 19(7): 9760–9772
35.Vinit Kumar Mishra, 2010. In vitro antagonism of Trichjoderma species against
Pythium aphanidermatum Phytology, 9: p. 28-35.
67 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
36. Weindling R. (1932), “Trichoderma lignorum as a parasite of other fungi”,
Phytopathology, 22, pp. 837-845.
37.Zoltan Nasztora, J.nos Horv.tha, Bal.zs Leitgeb (2015), Studying the Structural and Folding Features of Long-Sequence Trichobrachin Peptides, Chemistry & Biodiversity, Vol. 12, pp.1365-1378.
• Tài liệu tham khảo internet:
1. Nấm gây bệnh đốm trắng trên cây thanh long, ngày xem 14/7/2019
<https://123doc.org//document/2566881-nghien-cuu-xac-dinh-nam-gay-benh-loet- tren-cay-thanh-long.htm>
2. Tình hình bệnh dốm trắng trên cây thanh long, ngày xem 13/7/2019
<http://ppri.org.vn/tinh-hinh-benh-dom-trang-thanh-long-va-phuong-an-giai-quyet- c2a114.html>
3. Tổng quát về peptaibol, ngày xem 14/7/2019 <https://en.wikipedia.org/wiki/Peptaibol>
68
PHỤ LỤC A: Tỷ lệ đối kháng nấm Neoscytalidium dimidiatum
The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Dependent Variable: N Source Model Error Corrected Total Source T 1
N t Grouping for M eans of T (Alpha = 0.01)
Means covered by the same bar are not significantly different.
T Estimate 2X 67.0605 4X 64.6712 6X 63.1508 8X 61.6872 2
PHỤ LỤC B: Khả năng sinh trưởng của nấm Trichoderma TC25 và TC15 1. Khả năng sinh trưởng của nấm Trichoderma TC25 và TC15 sau 1 ngày
The TTEST Procedure Variable: D N 10 Mean P er ce nt
D
2.Khả năng sinh trưởng của nấm Trichoderma TC25 và TC15 sau 2 ngày The TTEST Procedure
Variable: D N 10 Mean 4.3500 4
P
TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com
D
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
PHỤ LỤC C: Phổ HPLC – UV của alamethicin và các chủng nấm khảo sát tại bước sóng 215nm
1. Phổ HPLC – UV của alamethicin tại bước sóng 215nm
Alamethicin
Hình 1. Phổ HPLC – UV của alamethicin tại bước sóng 215nm
2. Phổ HPLC – UV của Trichoderma TC25 tại bước sóng 215nm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
7
Hình 2. Phổ HPLC – UV của Trichoderma TC25 tại bước sóng 215nm 3. Phổ HPLC – UV của Trichoderma TC15 tại bước sóng 215nm
TC15
Hình 3. Phổ HPLC – UV của Trichoderma TC15 tại bước sóng 215nm
8
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
PHỤ LỤC D: Cơ sở dữ liệu các amino acid của peptaibol trích xuất từ CPD (Comprehensive Peptaibiotics Database)
ID Abbreviation 1 Aoh 2 APAE 3 b-Ala 4 BOC ------- 5 BTA 6 DAMP 7 Dec desmethyl- 8 AHMOD 9
9 DPD 10 DPD-NO 11 EtNva 12 HMDA 13 HKP 14 Hyleu 15 Hyp 16 Iva 17 LAU 18 Lxx 19 MDA 20 MeLeu 21 MePhe 10
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 22 MePro 23 MeVal ----- 24 MHA 25 MOO 26 MOTDA 27 MPD 28 MYR 29 Oc 30 ODec 31 PDA 11
32 Phaol 33 PIHPPE 34 Pip 35 Pyr 36 SBA 37 Vxx 38 3M-Pro 39 4MPro ABAPABEA 40 41 Ac 42 ACC 12
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 43 Add 44 Ahe 45 AHMOD 46 AHMP 47 Aib 48 AMAE, Tdol 13
49 AMD 50 AMO2 51 AMO3 52 AMO4 53 AMOD 54 Aod 55 Aod-Oac 56 Aoe 14
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 57 Ala 58 Arg 59 Asn 60 Glu 61 Gln 62 Gly 63 Ile 64 Leu 65 Lys 66 Phe 15
67 Pro 68 Ser 69 Thr 70 Trp 71 Tyr 72 Val 73 Alaol 74 Aibol 75 Prool 76 Vxxol 77 Valol 16
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 78 Ivaol 79 Lxxol 80 Leuol 81 Ileol 82 Pheol 83 Argol 84 Trpol 85 APPS 86 Serol 17
PHỤ LỤC E: Phổ HPLC – MS của 2 chủng nấm Trichoderma TC25 và TC15
18
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
Hình 4. Phổ phân tích HPLC-MS của chủng Trichoderma TC15
19
Hình 5. Phổ phân tích HPLC-MS của chủng Trichoderma TC25
20
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
21