CHƯƠNG III : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.2Kết quả phân tích sắc ký bằng phương pháp HPLC – UV
3.2 Hàm lượng peptaibol thu được trong dịch nuôi cấy của các chủng Trichoderma
3.2.2Kết quả phân tích sắc ký bằng phương pháp HPLC – UV
Bảng 3.4. Hàm lượng peptaibol sau khi tinh chế với dung mơi methanol thu được tại
bước sóng 215nm từ các chủng nấm khảo sát
Chủng nấm
TC25
TC15
Đối với hợp chất peptaibol của chủng Trichoderma TC25, các peak xuất hiện cũng tương tự như peptaibol alamethicin chuẩn tại phút thứ 5 và phút thứ 7. Kết quả cho thấy rằng dịch chiết thô thu nhận được từ chủng Trichoderma TC25 cũng có chứa các Aib đặc trưng của đoạn peptide peptaibol giống như alamethicin. Chủng TC25 cũng xuất hiện 2 peak ở phút thứ 5 và phút thứ 7 với hàm lượng tương ứng là 0,038 g/L và 0,188
49
g/L (pha loãng 10 lần). Hàm lượng này tương đương với peptaibol chuẩn alamethicin. Như vậy tổng hàm lượng peptaibol của 2 peak sau khi chạy qua phổ HPLC – UV là 0,218 g/L. So với dịch chiết thơ ban đầu được trình bày ở bảng 3.3 dịch chiết thơ thu được sau khi cơ quay là 4,6g/l dịch ni cấy thì hàm lượng peptaibol tinh sau khi chiết suất với dung môi methanol chỉ chiếm 4,73% so với dịch chiết thô ban đầu chiết với dung môi butanol như bảng 3.5. (Xem thêm phụ lục C hình 2).
Đối với hợp chất peptaibol của chủng Trichoderma TC15, các peak xuất hiện cũng tương tự như peptaibol alamethicin chuẩn tại phút thứ 5 và phút thứ 7. Kết quả cho thấy rằng dịch chiết thô thu nhận được từ chủng Trichoderma TC15 cũng có chứa các Aib đặc trưng của đoạn peptide peptaibol giống như alamethicin. Chủng TC15 cũng xuất hiện 2 peak ở phút thứ 5 và phút thứ 7 với hàm lượng tương ứng là 0,109 g/L và 0,590 g/L (pha loãng 10 lần). Hàm lượng này tương đương với peptaibol chuẩn alamethicin. Như vậy tổng hàm lượng peptaibol của 2 peak sau khi chạy qua phổ HPLC – UV là 0,699 g/L. So với dịch chiết thơ ban đầu được trình bày ở bảng 3.3 dịch chiết thơ thu được sau khi cơ quay là 4,4g/l dịch ni cấy thì hàm lượng peptaibol tinh sau khi chiết suất với dung môi methanol chiếm đến 15,89% so với dịch chiết thô ban đầu chiết với dung môi butanol như bảng 3.5. (Xem thêm phụ lục C hình 3).
Từ kết quả trên cho thấy các chủng TC15 và TC25 có khả năng sinh tổng hợp peptaibol với hàm lượng khác nhau. Trong đó chủng TC15 có khả năng sinh tổng hợp hàm lượng peptaibol cao hơn so với chủng TC25 và chiếm đến 15,89% trong tổng dịch chiết thu được . Tuy nhiên để phân tích các peptaibol này thuộc nhóm nào, do phân đoạn peak 1 có hàm lượng thấp hơn so với 2 peak thu được tại bước sóng 215nm phân giải trên hệ thống HPLC – UV, trong giới hạn thời gian cho phép của nghiên cứu, sinh viên ưu tiên phân tích phân đoạn peak 2 trong phân tích qua phổ HPLC-MS để xác định trình tự trên database CPD.