CHƯƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.4Phương pháp khảo sát sơ bộ hiệu quả kháng nấm của kháng sinh peptaibol trong
2.2 Vật liệu nghiên cứu
2.3.4Phương pháp khảo sát sơ bộ hiệu quả kháng nấm của kháng sinh peptaibol trong
trong điều kiện invitro (Chong-Wei Li et al., 2015)
Dịch chiết chứa peptaibol thơ Pha lỗng 2X, 4X, 6X, 8X
Môi trường PDA hấp khử trùng 1210C, 15 phút để nguội 55 – 600C Đổ đĩa
Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum tại tâm đĩa thạch, ủ 260C
Tiến hành đọc kết quả sau khi đĩa đối chứng đầy đĩa
Hình 2.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát sơ bộ hiệu quả kháng nấm
của hợp chất kháng sinh peptaibol trong điều kiện invitro
Chủng nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum được nuôi trên môi trường PDA trong 5 ngày ở điều kiện nhiệt độ phịng. Chuẩn bị mơi trường PDA hấp khử trùng và để nguội khoảng 55 – 600C. Dịch chiết peptaibol thô thu được sau khi cô quay (100ml peptailbol thô/250ml dịch ni cấy nấm Trichoderma) bổ sung vào thể tích mơi trường
43
PDA theo tỷ lệ pha loãng 2, 4, 6, 8x. Sau đó, dùng que đục lỗ đã được khử trùng đường kính 5mm lấy tản nấm của chủng nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum đặt lên giữa tâm của đĩa thạch. Các đĩa petri đem ủ ở nhiệt độ 260C, mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Sau khi đĩa đối chứng mọc đầy đĩa tiến hành ghi nhận kết quả đối kháng.
Chỉ tiêu theo dõi: Đường kính tản nấm bệnh ở các đĩa đối kháng và đối chứng.
Tính tốn khả năng đối kháng:
– Đường kính khuẩn lạc nấm bệnh (mm)
– Khả năng ức chế của dịch chiết Trichobrachin với nấm Neoscytalidium
dimidiatum được tính theo cơng thức của Fokkema, 1976:
PMIG = − × 100(%) Trong đó:
D: Đường kính khuẩn lạc của nấm bệnh ở cơng thức đối chứng (mm). d: Đường kính khuẩn lạc của nấm bệnh ở cơng thức đối kháng (mm). PIMG (Percent Inhibition of Mycelial Grow):
+ PIMG ≤ 50: Ức chế thấp.
+ 51 ≤ PIMG ≤ 60: Ức chế trung bình.
+ 61 ≤ PIMG ≤ 75: Ức chế cao.
+ PIMG > 75: Ức chế rất cao.
2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu
Các số liệu được thu thập và xử lý với chương trình excel và xử lý thống kê SAS v.9.4.
44
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP