Xác định hàm lượng sulphat (Terho, 1971)

- Dung dịch làm việc:

3. Xác định hàm lượng sulphat (Terho, 1971)

Việc xác định nhỏ số lượng nhỏ sulphat cĩ mặt trong các nhánh polysaccharide là rất quan trọng. Phương pháp được sử dụng phổ biến là dựa trên sự kết tủa của sulphat với benzidin và đo benzidin được kết tủa sau khi diazo hĩa hoặc đo trực tiếp bằng phổ UV. Nhưng do độ hịa tan của benzidin sulphate khá cao, cho nên bằng phương pháp này ta khơng thể xác định được lượng sulphat dưới 34 µg.

Phương pháp được mơ tả dưới đây dựa trên phản ứng hình thành hợp chất màu của Ba2+ với thuốc thử rhodizonate natri. Theo sự giảm cường độ màu của

dung dịch, khi SO42- vơ cơ kết tủa với Ba2+ của phức màu ta cĩ thể xác định được hàm lượng sulphat cĩ trong mẫu.

* Thuốc thử:

- Dung dịch đệm BaCl2: Lấy 10 ml acid acetic 2M, 2 ml BaCl2 và 8 ml NaHCO3 0,02 M vào bình định mức 100 ml. Thêm ethanol tuyệt đối đến vạch mức.

* Dung dịch rhodizonate natri: 5 mg (Merck) hịa tan trong 20 ml nước

cất khử ion. Thêm 100 mg acid ascobic và lắc dung dịch cho đến khi hịa tan hồn tồn. Định mức dung dịch trong bình định mức 100 ml bằng ethanol. Dung dịch này cĩ thể cĩ màu nâu nhạt. Dung dịch cĩ thể sử dụng sau 30 phút.

* Dung dịch sulphate chuẩn: pha đường chuẩn từ 212 µg sulphate trong 0,5 ml nước cất loại ion.

Tiến hành: Lấy 0,5 ml mẫu chuẩn, nước cất và mẫu carrageenan vào các

ống nghiệm (1075 mm, cĩ tráng teflon). Thêm 2 ml ethanol. Nếu cĩ kết tủa cần phải ly tâm cho đến sạch. Thêm 1 ml dung dịch đệm BaCl2 và 1,5 ml thuốc thử rhodizonate natri. Đậy nắp và trộn đều. Đặt các ống nghiệm trong tối 10 phút ở nhiệt độ phịng. Đo mật độ quang của dung dịch ở bước sĩng 520 nm với cuvet 1 cm. màu dung dịch khơng đổi trong 30 phút.

Thủy phân polysaccharide: Sự thủy phân được thực hiện với HCl lỗng

(0,51 N), ở 1000C trong 2 h. Dung dịch thủy phân sau đĩ được cơ trong chân khơng ở 60650C cho đến khơ. Hịa tan phần khơ đến thể tích 50 ml với nước cất loại ion. Lấy 0,5 ml để xác định sulphate.

Đường chuẩn xác định sulphat bằng rhodizonate natri thì tuyến tính trong khoảng nồng độ lập lại với sai số trung bình 5%. Độ nhạy của phép xác định

hàm lượng sulphate đạt từ 012 µg. Nếu sử dụng dung dịch BaCl2 đặc hơn cĩ

thể đạt 20 µg.

Chú ý: khi tính tốn hàm lượng sulphate trong mẫu cần phải tính bù trừ độ

hấp thụ quang của mẫu nước cất.