2.2. Phương pháp
2.2.7. Phƣơng pháp điện di
Điện di là phương pháp phổ biến dùng để phân tách các đoạn axit nucleic hoặc protein có kích thước, cấu hình khác nhau. Dưới tác dụng của điện trường, các phân tử này sẽ di chuyển về phía cực trái dấu với chúng trong giá thể điện di thường là gel agarose hay polyacrylamide. Trong q trình thực hiện thí nghiệm, chúng tơi sử dụng điện di ADN trên giá thể là gel agarose, gel polyacrylamide và điện di protein trên gel SDS-PAGE.
Điện di ADN là phương pháp phổ biến dùng để phân tách các đoạn axit nucleic có kích thước và cấu hình khác nhau. Dưới tác dụng của điện trường trong môi trường đệm trung hịa hoặc kiềm, các axit nucleic tích điện âm sẽ di chuyển về phía điện cực dương theo nguyên tắc: các phân tử nhỏ sẽ di chuyển nhanh hơn các phân tử lớn, các phân tử có cấu hình cồng kềnh sẽ di chuyển chậm hơn các phân tử nhỏ gọn. Các phân tử này được phát hiện dưới tia UV sau khi nhuộm với ethidium bromide.
Điện di protein trên gel polyacrylamide SDS-PAGE
Điện di protein trên gel polyacrylamide với sự có mặt của SDS (sodium dodecylsufate) (SDS-PAGE) cho phép phân ly các phân tử protein có trọng lượng khác nhau. SDS có điện tích âm rất lớn và có khả năng liên kết với mạch peptide nên làm âm hóa các phân tử protein. Vì vậy, trong điện trường tất cả các phân tử protein đều di chuyển về phía cực dương. Để tăng khả năng phân tách các protein trên gel, gel sử dụng cho điện di SDS-PAGE gồm 2 lớp gel cô 5% và lớp gel tách 10% hoặc 12%. Thành phần lớp gel cơ và gel tách được trình bày ở Phụ lục 3. Sau khi kết thúc quá trình điện di, bản gel sẽ được nhuộm với thuốc nhuộm Coomassie Brilliant Blue R-250 để phát hiện băng protein.
CHƢƠNG 3 - KẾT QUẢ