Vì AMF cộng sinh bắt buộc, chúng không thể phát triển trên môi trƣờng thạch dinh dƣỡng nhƣ các loại nấm khác. Do đó, việc phân loại các lồi AMF dựa vào đặc điểm hình thái của các bào tử AMF thu đƣợc theo các mô tả đặc trƣng. Các bào tử AMF phân lập đƣợc từ các mẫu đất trồng ngô ở Hà Nội và Hà Nam đƣợc
phản ứng của Melzer, sau đó quan sát dƣới kính hiển vi quang học. Đặc điểm phân loại của AMF dựa trên kích thƣớc, hình dạng, màu sắc, cấu trúc vách theo các mơ tả và hình ảnh đƣợc cung cấp bởi bộ sƣu tập quốc tế về Mycorhiza Fungi (http: //invam.caf.wvu.edu) tới chi, loài. Việc phân loại và định tên cụ thể nhƣ sau:
* Loài 1: Acaulospora gerdemanii
- Loài Acaulospora gerdemanii đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam. - Đặc điểm về hình thái: Màu nâu, hình ovan, thn dài, dẹt, kích thƣớc t 100-140 ì 180-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Vàng đậm, đều giữa 2 lớp tế bào.
Hình dạng: Ovan.
Vách tế bào: Tƣơng đối dầy, nhẵn, 02 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.2. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora gerdemanii (kích thƣớc bar 100µm)
* Lồi 2: Acaulospora longula
- Lồi Acaulospora longula đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam. - Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu, kích thƣớc từ 100-120 ì 130-160àm.
- Bo t đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: vàng nâu tới cam nâu.
Hình 3.3. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora longula, kích thƣớc bar 30 µm
* Loài 3: Acaulospora mellea
- Loài Acaulospora mellea đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: hình cầu, màu nâu, kích thƣớc từ 90-120 ì 100- 140àm.
- Đặc điểm bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Cam nhạt- nâu tới cam đậm, nâu, chủ yếu là cam nâu.
Hình dạng: Cầu, gần cầu.
Vách tế bào: 2 lớp, lớp ngồi mảnh, lớp trong dầy.
Hình 3.4. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora mellea, kích thƣớc bar 20 µm
* Loài 4: Acaulospora morrowiae
- Loài Acaulospora morrowiae đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam. - Đặc điểm về hình thái: Màu nâu, hình ovan, thn dài, dẹt, kích thƣớc từ 120-150 ì 180-240àm.
- Bo tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Vàng nâu nhạt, tạo xoáy đồng tâm.
Vách tế bào: Tƣơng đối dầy, nhẵn, 04 lớp tế bào, không vỡ.
Hình 3.5. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora morrowiae, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 5: Acaulospora rehmii
- Loài Acaulospora rehmii đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: hình cầu, màu nâu, đỏ nâu kích thc t 100-160 ì 150-200 àm.
- c im bo tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Vàng nâu tới cam nâu
Hình dạng: Cầu
Vách tế bào: 2 lớp, lớp ngồi mảnh, lớp trong dầy.
Hình 3.6. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora rehmii phân lập, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 6: Acaulospora sp. 1
- Loài Acaulospora sp. 1 đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
t 100-120 ì 100-160àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer
Màu sắc: Vàng đậm, đều giữa 2 lớp tế bào.
Hình dạng: Ovan, elip
Vách tế bào: 2 lớp, lớp ngồi mảnh, lớp trong dầy.
Hình 3.7. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora sp. 1, kích thƣớc bar 30 µm
* Lồi 7: Acaulospora sp. 2
- Loài Acaulospora sp. 2 đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu (ở giữa nâu nhạt, viền ngồi màu sáng), hình ovan, thuụn di, dt, kớch thc t 100-120 ì 160-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu nhạt phía ngồi, nâu đỏ trung tâm.
Hình dạng: Ovan
Vách tế bào: tƣơng đối dầy, nhẵn, 02 lớp tế bào, không vỡ.
* Loài 8: Acaulospora sp.3
- Loài Acaulospora sp.3 đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu (nâu đen)…hình ovan, thn dài, dẹt, kích thc t 82-120 ì 180 -240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đen phía ngồi, đỏ phần trung tâm, tạo xốy đồng tâm.
Hình dạng: Ovan.
Vách tế bào: dầy, nhẵn, 03 lớp tế bào, khơng vỡ.
Hình 3.9. Hình ảnh bào tử lồi Acaulospora sp.3, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 9: Centraspora pellucida
- Loài Centraspora pellucida đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội. - Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu trắng, vàng nht, kớch thc t 120 x160 ì 192-240àm.
- Bo tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: không bắt màu thuốc nhuộm, trắng, trong suốt.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: mảnh, phía ngồi có sợi cứng.
- Loài Dentiscutata nigra đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu trắng, vàng nhạt, kích thƣớc t 120 x160 ì 192-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: bắt màu thuốc nhuộm, màu vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: tƣơng đối dày.
Hình 3.11. Hình ảnh bào tử lồi Dentiscutata nigra, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 11: Dentiscutata reticulata
- Loài Dentiscutata reticulata đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và
Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng bóng, kích thƣớc t 140-180 ì 180- 230àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Khi còn non màu cam, về già đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
* Loài 12: Dentiscutata sp.
- Loài Dentiscutata sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 180- 220 ì 250-390àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: thƣờng bắt màu đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.13. Hình ảnh bào tử lồi Dentiscutata sp., kích thƣớc 50 µm
* Loài 13: Glomus ambisporum
- Loài Glomus ambisporum đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 150- 180 × 220-270 µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: thƣờng bắt màu đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Hình 3.14. Hình ảnh bào tử lồi Glomus ambisporum, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 14: Glomus multicaule
- Loài Glomus multicaule đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 150- 250µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu tối.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy phía ngồi, 01 lớp tế bào.
Hình 3.15. Hình ảnh bào tử lồi Glomus multicaule, kích thƣớc bar 50 µm.
* Lồi 14: Glomus intraradices
- Loài Glomus intraradices đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, nâu đen, kích thƣớc từ 150-200 × 240-270 µm.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: dầy, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.16. Hình ảnh bào tử lồi Glomus intraradice, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 16: Gigasspora albida
- Loài Gigasspora albida đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 280-300 ì 300-358 àm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.17. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora albida, kích thƣớc 50µm
* Lồi 17: Gigasspora decipiens9-31
Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 200- 280µm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.18. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora decipiens, kích thƣớc bar 50µm * Loài 18: Gigasspora gigantea
- Loài Gigasspora decipiens đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 240- 400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
* Lồi 19: Gigasspora margarita
- Loài Gigasspora margarita đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và
Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng tối, kích thƣớc từ 260- 400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: vàng tối.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Vách tế bào: dầy, sần sùi, 01 lớp tế bào.
Hình 3.20. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora margarita, kích thƣớc bar 50 µm
* Loài 20: Racocetra gregaria
- Loài Racocetra gregaria đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu đậm, kích thƣớc t 120-180 ì 150-220àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đỏ, nâu đỏ đậm.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Hình 3.21. Hình ảnh bào tử lồi Racocetra gregari, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 21: Rhizophagus clarus
- Loài Rhizophagus clarus đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và Hà
Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng nhạt, kích thƣớc từ 100-260µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: mỏng, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.22. Hình ảnh bào tử lồi Rhizophagus clarus, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 22: Rhizophagus sp.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng nâu, kích thƣớc từ 100-240µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: mỏng, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.23. Hình ảnh bào tử lồi Rhizophagus sp., kích thƣớc bar 50µm
* Loài 23: Septoglomus constrictum
- Loài Septoglomus constrictum đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội. - Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, nâu đen, kích thƣớc từ 100- 240µm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đen.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: dầy, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Đặc biệt, trong q trình phân lập và phân loại các lồi nấm AMF thu nhận từ đất trồng ngô tại Hà Nội và Hà Nam, chúng tôi đã thu đƣợc 3 lồi bào tử mà chƣa đƣợc cơng bố. Đây có thể là các lồi mới, cụ thể:
* Loài 24: New Genus 1 sp.
- Loài New Genus 1sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu đen ( màu trắng đục lẫn nâu đen), hình ovan, thn dài, cầu, gần cầu, có lơng cứng, kích thƣớc t 100150 ì 190-340àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đen, lông cứng không mất.
Hình dạng: cầu, ovan.
Vách tế bào: dầy, sần sùi, khơng vỡ
Hình 3.25. Hình ảnh bào tử lồi New Genus 1 sp., kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 25: New Genus 2 sp.
- Loài New Genus 2 sp.đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu đen, hình ovan, thn dài, cầu, gần cầu, xon c, kớch thc t 100-150 ì 180-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu sậm.
Hình dạng: cầu, ovan.
Hình 3.26. Hình ảnh của bào tử lồi New Genus 2 sp., kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 26: New Genus 3 sp.
- Loài New Genus 3 sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, khi cịn non có màu trắng, kích thƣớc từ 260-400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu tối
Hình dạng: gần cầu, cầu,
Vách tế bào: dầy, sần sùi, dễ vỡ, 01 lớp tế bào.
Nhƣ vậy, từ 30 mẫu đất trồng ngô ở Hà Nội và Hà Nam, chúng tôi đã phân lập đƣợc 11 chi và 26 lồi AMF, trong đó ba chi chƣa phân loại đƣợc, có thể là những chi mới, cần đƣợc nghiên cứu sâu hơn.