* Loài 9: Centraspora pellucida
- Loài Centraspora pellucida đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội. - Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu trắng, vàng nhạt, kích thƣớc từ 120 x160 × 192-240µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: không bắt màu thuốc nhuộm, trắng, trong suốt.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: mảnh, phía ngồi có sợi cứng.
- Lồi Dentiscutata nigra đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu trắng, vàng nhạt, kích thƣớc t 120 x160 ì 192-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: bắt màu thuốc nhuộm, màu vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: tƣơng đối dày.
Hình 3.11. Hình ảnh bào tử lồi Dentiscutata nigra, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 11: Dentiscutata reticulata
- Lồi Dentiscutata reticulata đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và
Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng bóng, kích thƣớc t 140-180 ì 180- 230àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: Khi còn non màu cam, về già đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
* Loài 12: Dentiscutata sp.
- Loài Dentiscutata sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 180- 220 ì 250-390àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: thƣờng bắt màu đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.13. Hình ảnh bào tử lồi Dentiscutata sp., kích thƣớc 50 µm
* Lồi 13: Glomus ambisporum
- Loài Glomus ambisporum đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 150- 180 ì 220-270 àm.
- Bo t c nhum vi thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: thƣờng bắt màu đỏ nâu.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Hình 3.14. Hình ảnh bào tử lồi Glomus ambisporum, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 14: Glomus multicaule
- Loài Glomus multicaule đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu sẫm, kích thƣớc từ 150- 250µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu tối.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy phía ngồi, 01 lớp tế bào.
Hình 3.15. Hình ảnh bào tử lồi Glomus multicaule, kích thƣớc bar 50 µm.
* Lồi 14: Glomus intraradices
- Loài Glomus intraradices đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, nâu đen, kích thc t 150-200 ì 240-270 àm.
Hỡnh dạng: gần cầu.
Vách tế bào: dầy, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.16. Hình ảnh bào tử lồi Glomus intraradice, kích thƣớc bar 50µm
* Loài 16: Gigasspora albida
- Loài Gigasspora albida đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 280-300 ì 300-358 àm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.17. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora albida, kích thƣớc 50µm
* Lồi 17: Gigasspora decipiens9-31
Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 200- 280µm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
Vách tế bào: dầy, 01 lớp tế bào.
Hình 3.18. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora decipiens, kích thƣớc bar 50µm * Lồi 18: Gigasspora gigantea
- Lồi Gigasspora decipiens đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu đen, kích thƣớc từ 240- 400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: đen.
Hình dạng: gần cầu, cầu.
* Lồi 19: Gigasspora margarita
- Loài Gigasspora margarita đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và
Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng tối, kích thƣớc từ 260- 400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: vàng tối.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Vách tế bào: dầy, sần sùi, 01 lớp tế bào.
Hình 3.20. Hình ảnh bào tử lồi Gigasspora margarita, kích thƣớc bar 50 µm
* Lồi 20: Racocetra gregaria
- Lồi Racocetra gregaria đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu nâu đậm, kích thƣớc t 120-180 ì 150-220àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đỏ, nâu đỏ đậm.
Hình dạng: gần cầu, cầu, có cuống thẳng.
Hình 3.21. Hình ảnh bào tử lồi Racocetra gregari, kích thƣớc bar 50µm
* Loài 21: Rhizophagus clarus
- Loài Rhizophagus clarus đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội và Hà
Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng nhạt, kích thƣớc từ 100-260µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: mỏng, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.22. Hình ảnh bào tử lồi Rhizophagus clarus, kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 22: Rhizophagus sp.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, màu vàng nâu, kích thƣớc từ 100-240µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu vàng nhạt.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: mỏng, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Hình 3.23. Hình ảnh bào tử lồi Rhizophagus sp., kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 23: Septoglomus constrictum
- Lồi Septoglomus constrictum đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nội. - Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, nâu đen, kích thƣớc từ 100- 240µm
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đen.
Hình dạng: gần cầu.
Vách tế bào: dầy, nhẵn, 01 lớp tế bào, dễ vỡ.
Đặc biệt, trong quá trình phân lập và phân loại các loài nấm AMF thu nhận từ đất trồng ngô tại Hà Nội và Hà Nam, chúng tôi đã thu đƣợc 3 loài bào tử mà chƣa đƣợc cơng bố. Đây có thể là các lồi mới, cụ thể:
* Loài 24: New Genus 1 sp.
- Loài New Genus 1sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu đen ( màu trắng đục lẫn nâu đen), hình ovan, thn dài, cầu, gần cầu, có lơng cứng, kích thƣớc t 100150 ì 190-340àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu đen, lông cứng khơng mất.
Hình dạng: cầu, ovan.
Vách tế bào: dầy, sần sùi, không vỡ
Hình 3.25. Hình ảnh bào tử lồi New Genus 1 sp., kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 25: New Genus 2 sp.
- Loài New Genus 2 sp.đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Màu nâu đen, hình ovan, thn dài, cầu, gần cầu, xon c, kớch thc t 100-150 ì 180-240àm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu sậm.
Hình dạng: cầu, ovan.
Hình 3.26. Hình ảnh của bào tử lồi New Genus 2 sp., kích thƣớc bar 50µm
* Lồi 26: New Genus 3 sp.
- Loài New Genus 3 sp. đƣợc phân lập đƣợc ở mẫu đất tại Hà Nam.
- Đặc điểm về hình thái: Hình gần cầu, cầu, khi cịn non có màu trắng, kích thƣớc từ 260-400µm.
- Bào tử đƣợc nhuộm với thuốc nhuộm của Melzer:
Màu sắc: nâu tối
Hình dạng: gần cầu, cầu,
Vách tế bào: dầy, sần sùi, dễ vỡ, 01 lớp tế bào.
Nhƣ vậy, từ 30 mẫu đất trồng ngô ở Hà Nội và Hà Nam, chúng tôi đã phân lập đƣợc 11 chi và 26 lồi AMF, trong đó ba chi chƣa phân loại đƣợc, có thể là những chi mới, cần đƣợc nghiên cứu sâu hơn.
3.3 Đánh giá đa dạng thành phần loài của AMF trong các vùng sinh thái nghiên cứu và mối tƣơng quan giữa điều kiện môi trƣờng sống tới sự đa dạng nghiên cứu và mối tƣơng quan giữa điều kiện môi trƣờng sống tới sự đa dạng thành phần loài của các chủng nấm rễ nội cộng sinh trên đất trồng ngô
3.3.1 Dựa vào thành phần loài
Sau khi phân loại các bào tử thu đƣợc bằng hình thái, chúng tơi tiến hành phân tích chi tiết về thành phần loài theo địa điểm thu mẫu cho thấy:
- Từ 15 mẫu đất thu thập ở đất Thƣờng Tín - Hà Nội, 688 bào tử AMF đƣợc phân lập. Nấm AMF đƣợc xếp vào 8 chi, 15 loài: Acaulospora (2 loài): A. amellea,
A. rehmii; Cetraspora (1 loài): C. pellucida; Dentiscutata (2 loài): D. nigra và D.
reticulata ; Glomus (3 loài): G. ambisporum, G. multicaule, Glomus intraradices; Gigaspora (4 loài): G. albida, G. decipiens, G. gigantea, G. margarita; Racocetra (1
loài): R. gregaria; Rhizophagus (2 loài): R. clarus, Rhizophagus sp; Septoglomus (01 loài): S. constrictum.
- Từ 15 mẫu đất thu thập ở đất tại Duy Tiên - Hà Nam, 2486 bào tử nấm AMF đƣợc phân lập. Phân tích hình thái học cho thấy, chúng thuộc 8 chi, 18 loài:
Acaulospora (7 loài): A. gerdemanii, A. longula; A. morrowiae, A. rehmii, Acaulospora sp.1, Acaulospora sp.2, Acaulospora sp.3, Dentiscutata (2 loài): D. reticulata, Dentiscutata sp.; Glomus (1 loài): G.intraradices; Gigaspora (3 loài): G. decipiens, G. gigantea, G. margarita; Rhizophagus (2 loài): R. clarus, Rhizophagus sp.
Đặc biệt có 3 chi có hình thái bào tử khác với các chi/lồi đã biết - chúng đƣợc cho rằng có thể đây sẽ là những đơn vị phân loại AMF mới, hình dạng bào tử khơng giống với các mô tả về AMF trƣớc đó. Cụ thể:
- Chi thứ nhất - New genus 1: Bào tử khi cịn ngun có hình cầu, gần cầu, có lơng cứng. Lơng cứng, khơng bị rụng trong khi làm tiêu bản, có hình cầu, hình
- Chi thứ hai - New genus 2: Bào tử khi cịn ngun có hình xoắn ốc trên bề mặt, hình ovan, thn dài, cầu, gần cầu, xoắn ốc. Khi phá vỡ bào tử và nhuộm thuốc nhuộm, bào tử có màu nâu sậm, hình cầu, ovan, vách tế bào: dầy, sần sùi, dễ vỡ, tạo rãnh xoắn ốc trên bề mặt.
- Chi thứ 3 - New genus 3: Bào tử khi cịn ngun có màu trắng, khi nhuộm thuốc nhuộm bắt màu nâu tối.
Tuy nhiên, để đƣa ra những nhận định về loài mới, chi mới cần có thêm những thơng tin và thêm các phƣơng pháp nghiên cứu đáng giá chính xác hơn để có thể đƣa ra những kết luận về những vấn đề này.
So sánh với các nghiên cứu trƣớc, có thể nhận thấy rằng sự đa dạng nấm rễ nội cộng sinh trên rễ cây ngô cao hơn so với một số loại cây lƣơng thực khác (lúa, cà chua) ở Việt Nam. So với nghiên cứu năm 2012 của Trần Thị Nhƣ Hằng và cộng sự về sự đa dạng của AMF trên rễ cây lúa và cây cà chua, các tác giả chỉ phát hiện đƣợc 5 chi: Scutellospora, Glomus, Acaulospora, Gigaspora, và Entrophospora [8]. Hay trong một nghiên cứu về đa dạng AMF trên rễ cây cam ở
Quỳ Hợp, Nghệ An, từ 60 mẫu đất, các tác giả cũng chỉ phát hiện đƣợc chỉ có 6 chi: Acaulospora, Entrophospora, Glomus, Sclerocystis, Glomites and Gigaspora, 16 loài [9]. Tuy nhiên, so với cá nghiên cứu khác trên thế giới thì có sự tƣơng đồng: Zhang và cs 2003 đã tìm đƣợc 47 lồi AMF từ đất khơ hạn hay Wang và cộng sự (2008) đã tìm đƣợc 33 lồi AMF từ đất ngập mặn, Zhao và cộng sự (2003) tìm đƣợc 5 chi, 27 lồi AMF từ rừng mƣa nhiệt đới Xishangbanna...[79, 80].
3.3.2 Dựa vào tần suất xuất hiện
Sau khi đƣợc phân loại bằng hình thái, các bào tử AMF đƣợc tiến hành đánh giá thêm sự đa dạng thành phần loài bằng cách dựa trên tần suất xuất hiện các chi, loài. Kết quả chi tiết thể hiện tại Bảng 3.2, Bảng 3.3, Hình 3.28 và Hình 3.29.
Bảng 3.2. Tần suất xuất hiện của các chi AMF
STT Tên chi Số lần xuất hiện Tần suất xuất hiện Hà Nội Hà Nam Hà Nội Hà Nam
1 Acaulospora 13,00 44,00 12,4 37,6 2 Cetraspora 6 0 5,7 0,0 3 Dentiscutata 15 15 14,3 12,8 4 Glomus 20 5 19,0 4,3 5 Gigaspora 34 35 32,4 29,9 6 Racocetra 2 0 1,9 0,0 7 Rhizophagus 8 9 7,6 7,7 8 Septoglomus 7 0 6,7 0,0 9 New Genus 1 0 2 0,0 1,7 10 New Genus 2 0 5 0,0 4,3 11 New Genus 3 0 2 0,0 1,7 105,00 117,00 100,00 100,00
Nhận xét: Qua bảng 3.2 và hình 3.28 cho thấy: Đa dạng của các lồi AMF trong đất trồng ngô ở Hà Nội đƣợc chia vào 8 chi: Acaulospora; Cetraspora; Dentiscutata; Gigaspora; Glomus; Racocetra; Septoglomus. Trong số đó, Dentiscutata, Racocetra, Rhizophagus và Septoglomus lần đầu tiên công bố tại Việt Nam. Các chi Acaulospora; Dentiscutata; Gigaspora; Glomus là những chi chiếm ƣu thế với tần suất xuất hiện lần lƣợt là 12,40 %; 14,3 %; 32,4 % và 19,0 %. Tại đất trồng ngô ở Hà Nam cũng ghi nhận nhiều sự khác biệt, 8 chi đƣợc tìm thấy ở các mẫu này là Acaulospora; Dentiscutata; Glomus; Gigaspora; Rhizophagus và 3 chi New Genus 1, New Genus 2, New Genus 3.
Trong đó, Acaulospora, Dentiscutata, Gigaspora là những chi chiếm ƣu thế
tần suất xuất hiện lần lƣợt là: 37,6 % và 29,9% (Bảng 3.2 và Hình 3.28). Đặc biệt có 3 chi đƣợc cho là mới phát hiện đƣợc gồm có New Genus 1, New Genus 2, New Genus 3. Tuy nhiên, để đƣa ra những nhận định về lồi mới, chi mới cần có thêm những thơng tin và thêm các phƣơng pháp nghiên cứu đáng giá chính xác hơn để có thể đƣa ra những kết luận về những vấn đề này.
Bảng 3.3. Tần suất xuất hiện của các loài AMF
STT Tên loài Số lần xuất hiện Tần suất xuất hiện
Hà Nội Hà Nam Hà Nội Hà Nam
1 A. gerdemanii 0 9 0 7,69 2 A. longula 0 5 0 4,27 3 A.mellea 11 0 10,5 0,00 4 A.morrowiae 0 5 0 4,27 5 A.rehmii 2 7 1,9 5,98 6 Acaulospora sp.1 0 6 0 5,13 7 Acaulospora sp.2 0 5 0 4,27 8 Acaulospora sp.3 0 7 0 5,98 9 C.pellucida 6 0 5,7 0,00 10 D.nigra 6 0 5,7 0,00 11 D.reticulata 9 5 8,6 4,27 12 Dentiscutata sp. 0 10 0,0 8,55 13 G. ambisporum 2 0 1,9 0,00 14 G. multicaule 11 0 10,5 0,00 15 G. intraradices 7 5 6,7 4,27 16 G. albida 3 0 2,9 0,00 17 G.decipiens 15 15 14,3 12,82 18 G. gigantea 13 15 12,4 12,82 19 G.margarita 3 5 2,9 4,27 20 R. gregaria 2 0 1,9 0,00 21 R.clarus 4 5 3,8 4,27 22 Rhizophagus sp. 4 4 3,8 3,42 23 S.constrictum 7 0 6,7 0,00 24 New Genus 1 0 2 0 1,71 25 New Genus 2 0 5 0 4,27 26 New Genus 3 0 2 0 1,71 105 117 100 100
Hình 3.29. Biểu đồ tần suất xuất hiện của các loài AMF
Nhận xét: Qua bảng 3.3 và hình 3.29 cho thấy tại những mẫu đất trồng ngơ ở Hà Nội đã có 16 loài đƣợc phát hiện, trong số đó có 4 lồi Gigaspora decipiens, Gigaspora gigantean, Glomus multicaule và Acaulospora mellea là những loài chiếm ƣu thế, tần suất xuất hiện lần lƣợt là: 14,3 %; 12,4 %; 10,5 % và 10,5 %. Còn tại đất trồng ngô Hà Nam, phát hiện đƣợc 18 lồi, trong đó 2 lồi Gigaspora decipiens và Gigaspora gigantean là những loài chiếm ƣu thế, tần suất xuất hiện lần