Sản phẩm PCR tinh sạch được gửi đi để giải trình tự đoạn gen mã hóa 16S ribosome. Kết quả giải trình tự được Blast trên website https://blast.ncbi.nlm.nih.gov và so sánh mức độ tương đồng (Bảng 3.3) (Phụ lục 1).
Bảng 3.3 : Kết quả định danh bằng kỹ thuật sinh học phân tử Ký hiệu Ký hiệu
chủng Tên chủng trên GenBank
Tỉ lệ tƣơng đồng (%) NCBI Accession number ST1 Clostridium beijerinckii PS3 100% MF136817 ST4 Clostridium bifermentans DPH-1 99% MF125286 ST5 Clostridum butyricum JCM 1391 100% MF125285 ST8 Enterobacter cloacae MCE64A9 99% MF136819
Kết quả Blast trên NCBI hỗ trợ cho việc định danh sơ bộ theo khóa phân loại Bergy. Khi so sánh kết quả giải trình tự 16S rRNA của các loài tương đồng trên Genbank cho thấy: Chủng ST1 có tỷ lệ tương đồng 100% so với đoạn 16S rRNA của chủng Clostridium beijerinckii PS3và được định danh là Clostridium beijerinckii ST1. Chủng ST4 có tỷ lệ tương đồng 99% so với đoạn 16S rRNA của chủng Clostridium bifermentans DPH-1 và được định danh là Clostridium bifermentans ST4.Chủng ST5
có tỷ lệ tương đồng 100% so với đoạn 16S rRNA của chủng Clostridum butyricum
JCM 1391 và được định danh là Clostridum butyricum ST5. Chủng ST8 có tỷ lệ tương đồng 99% so với chủng Enterobacter cloacae MCE64A9 và được định danh là Enterobacter cloacae ST8.
Kết quả này sẽ được sử dụng cho những nghiên cứu tiếp theo về sản xuất hydro.
3.1.4. Hoạt tính enzyme của các chủng Clostridium sp. phân lập
Việc xác định hoạt tính enzyme của vi sinh vật được thực hiện trong các đĩa thạch petri riêng lẻ. Kết quả xác đinh hoạt tính enzyme được thể hiện dưới Hình 3.3.
Khả năng phân giải protein
Khả năng phân giải tinh bột
Khả năng phân giải cellulose C. beijerinckii ST1 C. bifermentans ST4 C. butyricum ST5