CHƢƠNG 2 ĐỐI TƢỢNG, MỤC TIÊU, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. Phân lập các hợp chất từ san hô mềm Sinularia erecta
3.1.1. Phân lập các hợp chất
Mẫu san hô mềm Sinularia erecta tươi (1,5 kg) sau khi được xử lý theo phương pháp xử lý mẫu sinh vật biển, được cắt thành từng miếng nhỏ và ngâm chiết MeOH sử dụng sóng siêu âm 3 lần (mỗi lần 2h) ở nhiệt độ phòng thu được cặn chiết MeOH tổng (150 g, M). Cặn MeOH được hịa vào nước (1.0 lít) và chiết phân lớp với n-hexane. Cô quay loại bỏ dung môi dưới áp suất giảm thu được cặn chiết n- hexane (48g, H) . Sau đó phần dịch nước được bổ sung dichloromethane tỉ lệ 1 : 1 thu được căn chiết dichloromethane (2g , D).
Hình 3.1. Sơ đồ chiết các phân đoạn từ mẫu Sinularia erecta
Cặn chiết H và D được tiến hành phân tách thô bằng hệ thống sắc ký lỏng trung áp với cột nhồi silica gel pha thường. Rửa giải gradient bằng hệ dung môi dichloromethane : methanol (từ 100:1 đến 1:1) thu được 9 phân đoạn (H1→H9). Phân đoạn H3 (2g) tiếp tục được phân tách bằng hệ thống sắc ký lỏng trung áp với
cột pha đảo YMC RP-18, sử dụng pha động là methanol: nước (2:1) thu được 2 phân đoạn ký hiệu H3A và H3B. Phân đoạn H3A (120 mg) được phân tách tiếp bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi dichloromethane: acetone (20/1) kết hợp với sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane : etyl acetate 5/1 thu được hợp chất 4 (1,8 mg). Phân đoạn H3B (900 mg) được phân tách tiếp bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane : acetone (10/1) kết hợp với sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi dichloromethane: etyl acetate 5/1 thu được hợp chất 5 (2,8 mg).
Hình 3.2. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ phân đoạn n-Hexan (H)
Phân đoạn H4 + H5 (10g) được phân tách bằng hệ thống sắc ký lỏng trung áp với cột pha đảo YMC RP-18, sử dụng pha động là methanol: H2O (1/1 →10/1) thu
được 7 phân đoạn ký hiệu H5A →H5G. Phân đoạn H5B (120 mg) được phân tách tiếp bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi dichloromethane: acetone (10/1) kết hợp với sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane : acetone 7/1 thu được 3 hợp chất: 1 (1,5 mg), 2 (3mg), 3 (3,5mg). Phân đoạn H5C (190 mg) được phân tách tiếp bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi dichloromethane: acetone (15/1) thu được 4 phân đoạn H5C1- H5C4. Phân đoạn H5C3(16mg) được phân tách trên sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane : acetone 5/1 thu được hợp chất 6 (5 mg). Phân đoạn H5E (55mg ) được phân tách tiếp bằng sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi dichloromethane: acetone (10/1) kết hợp với sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n- hexane: acetone 5/1 thu được hợp chất 7 (1,6 mg) và hợp chất 8 (4,7mg).