Cấu trúc các hợp chất phân lập đƣợc từ san hô mềm Sinuralia erecta 3, 5-dihydroxyeudesma-4(15),11-diene (1) (Chất mới) 4(15)-Eudesmene-1β,6α-diol (2) 6-hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one (3) 4β,15-epoxyeudesmene-1,6α-diol (4) aromadendrane-4,10-diol ( 5 ) aromadendrane-4,10-diol ( 6 ) aromadendrane-4,10-diol ( 7 ) alloaromadendrane-4,10-diol ( 8 )
4.2. Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ các hợp chất phân lập đƣợc
4.2.1. Kết quả thử sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào
Các hợp chất phân lập được tiến hành lựa chọn để nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào, mẫu cặn chiết n-hexane và các chất sạch 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8 được thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào trên 3 dòng tế bào ung thư: ung thư phổi người A549, ung thư cổ tử cung người Hela và ung thư tuyến tụy người PANC-1.
Bảng 4.9. Kết quả thử sàng lọc độc tế bào của các mẫu
Mẫu N.độ TB sống sót (CS%)
Hela A549 PANC-1
% TB sống Sai số % TB sống Sai số % TB sống Sai số Control 100,00 0,94 100,00 0,11 100,00 0,57 Cặn chiết n- hexane 30 µg/mL 63,48 2,55 52,03 2,96 57,17 0,84 100 µg/mL 12,91 3,66 6,77 1,19 6,68 0,90 Hợp chất 1 30 µM 72,56 2,53 33,98 1,07 66,76 1,58 100 µM 60,85 3,60 22,44 2,94 53,75 1,64 Hợp chất 2 30 µM 74,13 1,29 70,68 1,61 71,98 1,97 100 µM 67,03 2,88 53,75 3,40 69,56 2,46 Hợp chất 3 30 µM 60,82 2,46 62,19 1,34 56,42 1,68 100 µM 51,79 2,73 62,04 3,98 53,46 1,53 Hợp chất 4 30 µM 83,41 2,73 72,52 0,78 73,78 2,60 100 µM 75,87 2,10 50,84 2,86 72,30 1,68 Hợp chất 5 30 µM 83,03 2,53 63,84 1,92 74,73 3,85 100 µM 78,09 1,15 69,92 3,28 62,83 1,13 Hợp chất 6 30 µM 82,57 1,69 72,02 2,37 64,17 0,15 100 µM 75,03 0,82 62,96 3,56 55,30 2,66 Hợp chất 7 30 µM 82,92 3,18 66,90 1,61 62,59 1,38 100 µM 71,37 1,62 60,28 2,19 55,09 0,90
Hợp chất 8 30 µM 80,21 2,18 68,88 4,71 62,03 1,42 100 µM 65,43 1,87 55,43 1,20 55,30 1,01 Camptothecin* 0.1 µM 68,74 0,75 62,14 0,66 39,40 0,58 10 µM 26,41 0,31 35,38 0,13 9,23 0,48
*Camptothecin: được sử dụng làm chất chuẩn
Từ những phân tích trên bảng 4.9 cho thấy mẫu cặn chiết n-hexane thể hiện hoạt tính diệt tế bào mạnh (% tế bào sống sót <15%) ở nồng độ thử nghiệm 100 µg/mL trên cả 3 dịng tế bào ung thư phổi người A549, ung thư cổ tử cung người Hela và ung thư tuyến tụy người PANC-1. Ở dòng tế bào ung thư phổi người A549, hợp chất 1 thể hiện hoạt tính diệt tế bào mạnh ở cả hai nồng độ thử nghiệm 30 µM và 100 µM. Do đó, hợp chất 1 tiếp tục được đánh giá IC50.
Tìm giá trị IC50: Nồng độ ức chế 50%, IC50 được xây dựng trên 5 nồng độ thử nghiệm. Giá trị IC50 được xác định theo phương pháp hồi quy tuyến tính trên phần mềm Graphpad Prism 5.0
Kết quả nghiên cứu cho thấy giá trị IC50 (µM) của mẫu 1 trên dòng tế bào A549 là 14,79 ± 0,91, so với chất chuẩn được sử dụng Camptothecin 11,42 ± 0,13
4.2.2. Kết quả thử hoạt tính ức chế sự sản sinh nitric oxide
Mẫu cặn chiết n-hexane và các chất 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 được thử nghiệm
hoạt tính ức chế sự sản sinh nitric oxide (NO) trên tế bào RAW264.7
Bảng 4.10. Kết quả thử sàng lọc hoạt tính ức chế sản sinh NO của các mẫu
Tên mẫu N.độ % ức chế Sai số % tế bào sống Sai số
Control 100,00 0,50 118,17 3,16 LPS 0,00 1,00 100,00 2,04 Cặn chiết n- hexane 30 µg/mL 19,05 1,50 117,87 2,50 100 µg/mL 65,08 0,76 104,82 0,81 Hợp chất 1 30 µM 26,59 1,89 110,96 0,49 100 µM 35,32 0,76 107,83 2,61 Hợp chất 2 30 µM 15,48 2,78 106,93 2,07 100 µM 19,05 2,78 105,40 2,42 Hợp chất 3 30 µM 10,51 0,58 107,49 1,10
100 µM 15,32 1,89 105,39 0,76 Hợp chất 4 30 µM 10,51 2,84 76,22 1,81 100 µM 15,32 2,02 74,04 0,91 Hợp chất 5 30 µM 2,78 1,26 113,77 2,52 100 µM 9,52 0,50 108,93 1,11 Hợp chất 6 30 µM 1,59 2,75 109,41 0,49 100 µM 8,33 2,29 107,38 0,93 Hợp chất 7 30 µM 11,11 1,26 85,91 3,56 100 µM 22,62 1,00 81,80 2,90 Hợp chất 8 30 µM 26,19 1,80 101,21 1,47 100 µM 27,78 1,89 98,53 3,21 Cardamonin* 0,3 µM 26,98 1,61 104,17 1,63 3 µM 74,60 0,58 98,60 1,15
*Cardamonin: được sử dụng làm chất chuẩn
Kết quả thử nghiệm cho thấy: trong 13 mẫu, cặn chiết n-hexane có khả năng ức chế sự sản sinh NO ở nồng độ 100 µg/mL (65,08%). Khơng hợp chất nào có khả năng gây chết tế bào ở các nồng độ thử nghiệm.
KẾT LUẬN
1. Đã tiến hành thu thập mẫu san hô mềm Sinularia erecta Tixier-Durivault, 1945 ở khu vực đảo Cù Lao Chàm, Quảng Nam phục vụ nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học.
2. Từ lồi san hô mềm Sinularia erecta, bằng các phương pháp sắc ký kết
hợp với hệ dung mơi thích hợp đã chiết tách, phân lập được 08 hợp chất sesquiterpene trong đó có 1 chất mới. Cấu trúc hóa học của các hợp chất được xác định bằng cách kết hợp số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều, hai chiều. Cụ thể như sau: + Hợp chất 1: 3β,5α-dihydroxyeudesma-4(15),11-diene (chất mới) + Hợp chất 2: 4(15)-Eudesmene-lβ,6-diol + Hợp chất 3: 6-Hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one + Hợp chất 4: 4β,15-Epoxyeudesmene-1,6α-diol + Hợp chất 5: Aromadendrane-4,10-diol + Hợp chất 6: Aromadendrane-4,10-diol + Hợp chất 7: aromadendrane-4,10-diol + Hợp chất 8: alloaromadendrane-4,10-diol
3. Đã tiến hành nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào trên ba dòng tế bào ung thư thử nghiệm (ung thư phổi người A549, ung thư cổ tử cung người Hela và ung thư tuyến tụy người PANC-1) và ức chế sự sản sinh nitric oxide (NO). Kết quả cho thấy ở dòng tế bào ung thư phổi người A549, hợp chất 1 có hoạt tính diệt tế bào tốt với giá trị IC50 là 14.79 ± 0.91 µM. Kết quả thử nghiệm khả năng ức chế ức chế sự sản sinh NO các hợp chất không thu được kết quả tốt.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
1. Phạm Quốc Long, Lưu Văn Huyền, Andrey B. Imbs, Tatiana N. Dautova (2008), Lipit và axit béo của rạn san hô Việt Nam , Đa dạng sinh học, NXB Khoa học và Kỹ thuật.
2. Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm, Nguyễn Hải Đăng (2007), Các hợp chất có hoạt tính sinh học từ sinh vật biển, NXB Khoa học và Kỹ thuật.
3. Võ Sĩ Tuấn, Nguyễn Văn Long, Phan Kim Hoàng, Hoàng Xuân Bền, Hứa Thái Tuyến, Nguyễn Xuân Hòa, Lyndon Devantier (2005), Đa dạng sinh học
khu bảo tồn biển Vịnh Nha Trang, Khánh Hòa, Việt Nam
Tiếng Anh
4. Ahmed A. F., Su J. H., Shiue R. T., Pan X. J., Dai C. F., Kuo Y. H., Sheu J. H. (2004), "New beta-caryophyllene-derived terpenoids from the soft coral Sinularia nanolobata", J Nat Prod, 67(4), PP. 592-7.
5. Ando M., Kikuchi K., Isogai K., Ishiwatari T., Hirata N., Yamazaki H. (1994), "Synthetic Studies of Sesquiterpenes with a Cis-Fused Decalin System, 5. A Synthetic Approach to the Study of Structure-Activity Relationships of the Termiticidal Norsesquiterpenoids, Chamaecynone and Related Compounds", Journal of Natural Products, 57(7), PP. 924-933. 6. Beechan C. M., Djerassi C., Eggert H. (1978), "Terpenoids-
LXXIV11Terpenoids LXXIII: C.M. Beechan, C. Djerassi, J.S. Finer and J. Clardy, Tetrahedron Letters 2395 (1977).: The sesquiterpenes from the soft coral sinularia mayi", Tetrahedron, 34(16), PP. 2503-2508.
7. Berridge M. V., Herst P. M., Tan A. S. (2005), "Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction", Biotechnol Annu Rev, 11, PP. 127-152.
8. Bohlmann F., Grenz M., Jakupovic J., King R. M., Robinson H. (1983), "Four heliangolides and other sesquiterpenes from Brasilia sickii",
Phytochemistry, 22(5), PP. 1213-1218.
9. Cocker W., Mcmurry T. B. H. (1960), "Stereochemical relationships in the eudesmane (selinane) group of sesquiterpenes", Tetrahedron, 8(3), PP. 181- 204.
10. Chen D., Chen W., Liu D., Van Ofwegen L., Proksch P., Lin W. (2013), "Asteriscane-type sesquiterpenoids from the soft coral Sinularia capillosa", J
Nat Prod, 76(9), PP. 1753-63.
11. Chen W. F., Yin C. T., Cheng C. H., Lu M. C., Fang L. S., Wang W. H., Wen Z. H., Chen J. J., Wu Y. C., Sung P. J. (2015), "Norcembranoidal diterpenes from the cultured-type octocoral Sinularia numerosa", Int J Mol Sci, 16(2), PP. 3298-3306.
12. Goldsby G., Burke B. A. (1987), "Sesquiterpene lactones and a sesquiterpene diol from jamaican ambrosia peruviana", Phytochemistry, 26(4), PP. 1059-
1063.
13. Huang C. Y., Liaw C. C., Chen B. W., Chen P. C., Su J. H., Sung P. J., Dai C. F., Chiang M. Y., Sheu J. H. (2013), "Withanolide-based steroids from the cultured soft coral Sinularia brassica", J Nat Prod, 76(10), PP. 1902-1908. 14. Inada A., Akiba T., Murata H., Inatomi Y., Nakanishi T., Darnaedi D.
(2002), "A New Eudesmane Sesquiterpene from the Twigs of Aglaia grandis", Natural medicines, 56(4), PP. 147-149.
15. Jenniskens L. H. D., Wijnberg J. B. P. A., De Groot A. (1991), "Base- induced and -directed elimination and rearrangement of perhydronaphthalene-1,4-diol monosulfonate esters. Total synthesis of (.+-.)- alloaromadendrane-4.beta.,10.alpha.-diol and (.+-.)-alloaromadendrane- 4.alpha.,10.alpha.-diol", The Journal of Organic Chemistry, 56(23), PP.
16. Kawaguchi Y., Ochi T., Takaishi Y., Kawazoe K., Lee K.-H. (2004), "New Sesquiterpenes from Capsicum annuum", Journal of Natural Products,
67(11), PP. 1893-1896.
17. Kitajima J., Suzuki N., Satoh M., Watanabe M. (2002), "Sesquiterpenoids of Torilis japonica fruit", Phytochemistry, 59(8), PP. 811-815.
18. Lakshmi V., Kumar R. (2009), "Metabolites from Sinularia species", Nat Prod Res, 23(9), PP. 801-850.
19. Liang X.-T., Fang W.-S. (2006), Medicinal chemistry of bioactive natural products, John Wiley & Sons.
20. Lin W. J., Wu T. Y., Su T. R., Wen Z. H., Chen J. J., Fang L. S., Wu Y. C., Sung P. J. (2015), "Terpenoids from the Octocoral Sinularia gaweli", Int J Mol Sci, 16(8), PP. 19508-19517.
21. Matsuo A., Atsumi K., Nadaya K., Nakayama M., Hayashi S. (1981), "13C NMR chemical shifts of ovalifoliene and related compounds with the 2,3- seco-alloaromadendrane skeleton: Structure of (+)-9α-acetoxyovalifoliene, a plant growth inhibitor", Phytochemistry, 20(5), PP. 1065-1068.
22. Mosmann T. (1983), "Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays", J Immunol Methods, 65(1-2), PP. 55-63.
23. Ngoc N. T., Huong P. T. M., Thanh N. V., Cuong N. X., Nam N. H., Thung D. C., Kiem P. V., Minh C. V. (2017), "Sesquiterpene constituents from the soft coral Sinularia nanolobata", Natural product research, 31(15), PP. 1799- 1804.
24. Qin G. F., Tang X. L., Sun Y. T., Luo X. C., Zhang J., Van Ofwegen L., Sung P. J. (2018), "Terpenoids from the Soft Coral Sinularia sp. Collected in Yongxing Island", 16(4), PP.
25. Shen S., Zhu H., Chen D., Liu D., Ofwegen L. V., Proksch P., Lin W. (2012), "Pavidolides A–E, new cembranoids from the soft coral Sinularia pavida", Tetrahedron Letters, 53(43), PP. 5759-5762.
26. Shih H. J., Tseng Y. J., Huang C. Y., Wen Z. H., Dai C. F., Sheu J. H. (2012), "Cytotoxic and anti-inflammatory diterpenoids from the Dongsha Atoll soft coral Sinularia flexibilis", Tetrahedron, 68(1), PP. 244-249.
27. Shimoma F., Kondo H., Yuuya S., Suzuki T., Hagiwara H., Ando M. (1998), "Enantioselective Total Syntheses of (−)-7βH-Eudesmane-4α,11-diol and (+)-ent-7βH-Eudesmane-4α,11-diol", Journal of Natural Products, 61(1),
PP. 22-28.
28. Tursch B. (1976), Some Recent Developments in the Chemistry of Alcyonaceans, V 48, 1-6.
29. Thao N. P., Nam N. H., Cuong N. X., Luyen B. T., Tai B. H., Kim J. E., Song S. B., Kiem P. V., Minh C. V., Kim Y. H. (2014), "Inhibition of NF- kappaB transcriptional activation in HepG2 cells by diterpenoids from the soft coral Sinularia maxima", Arch Pharm Res, 37(6), PP. 706-712.
30. Thao N. P., Nam N. H., Cuong N. X., Quang T. H., Tung P. T., Dat Le D., Chae D., Kim S., Koh Y. S., Kiem P. V., Minh C. V., Kim Y. H. (2013), "Anti-inflammatory norditerpenoids from the soft coral Sinularia maxima",
Bioorg Med Chem Lett, 23(1), PP. 228-231.
31. Thomas A. F., Ozainne M., Decorzant R., Näf F., Lukacs G. (1976), "10- Epijunenol, a new cis-eudesmane sesquiterpenoid", Tetrahedron, 32(18), PP. 2261-2264.
32. Wang G. H., Chou T. H., Lin R. J., Sheu J. H., Wang S. H., Liang C. H. (2009), "Cytotoxic Effect of the Genus Sinularia Extracts on Human SCC25 and HaCaT Cells", J Toxicol, 2009, PP. 634-868.
33. Xu Z., Chang F.-R., Wang H.-K., Kashiwada Y., Mcphail A. T., Bastow K. F., Tachibana Y., Cosentino M., Lee K.-H. (2000), "Anti-HIV Agents 45 and Antitumor Agents 205. Two New Sesquiterpenes, Leitneridanins A and B, and the Cytotoxic and Anti-HIV Principles from Leitneria floridana",
34. Yang B., Liao S., Lin X., Wang J., Liu J., Zhou X., Yang X., Liu Y. (2013), "New sinularianin sesquiterpenes from soft coral Sinularia sp", Mar Drugs,
11(12), PP. 4741-50.
35. Zhang H.-J., Tan G. T., Santarsiero B. D., Mesecar A. D., Hung N. V., Cuong N. M., Doel Soejarto D., Pezzuto J. M., Fong H. H. S. (2003), "New Sesquiterpenes from Litsea verticillata", Journal of Natural Products, 66(5), PP. 609-615.
CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN VĂN
+ Huong NT, Ngoc NT, Thanh NV, Dang NH, Cuong NX, Nam NH, Thung DC,The HV, Tuan VS, Kiem PV, Minh CV. Eudesmane and aromadendrane sesquiterpenoids from the Vietnamese soft coral Sinularia erecta. Natural Product Research, 2017
+ Nguyen Thi Huong, Ninh Thi Ngoc, Tran Manh Tri, Nguyen Van Thanh, Nguyen Xuan Cuong, Do Cong Thung, Nguyen Hoai Nam, Chau Van Minh. Structure elucidation of eight known sesquiterpenoids from the soft coral Sinularia erecta. Vietnam journal of chemistry 55(6e) 150 - 154, 2017
PHỤ LỤC 1. Phụ lục phổ
1.1. Phụ lục phổ của hợp chất 1
Phổ HR-ESI-MS của hợp chất 1
Phổ 13C-NMR của hợp chất 1
Phổ HMBC của hợp chất 1
1.2. Phụ lục phổ của hợp chất 2
Phổ 1H-NMR của hợp chất 2
Phổ 13
Phổ HSQC của hợp chất 2
1.3. Phụ lục phổ của hợp chất 3
Phổ 1H-NMR của hợp chất 3
Phổ HSQC của hợp chất 3
1.4. Phụ lục phổ của hợp chất 4
Phổ 1H-NMR của hợp chất 4
Phổ HSQC của hợp chất 4
1.5. Phụ lục phổ của hợp chất 5
Phổ 1H-NMR của hợp chất 5
Phổ HSQC của hợp chất 5
1.6. Phụ lục phổ của hợp chất 6
Phổ 1H-NMR của hợp chất 6
Phổ HSQC của hợp chất 6
1.7. Phụ lục phổ của hợp chất 7
Phổ 1H-NMR của hợp chất 7
Phổ HSQC của hợp chất 7
1.8. Phụ lục phổ của hợp chất 8
Phổ 1
H-NMR của hợp chất 8
Phổ HSQC của hợp chất 8