Mô mỡ dƣới da đƣợc lấy vơ trùng từ phịng mổ và bảo quản ngay trong tube môi trƣờng, giữ ở 40C và vận chuyển về labo. Môi trƣờng bảo quản mơ mỡ bao gồm DMEM có 500U/ml penicillin, 500microgam/ml streptomycin và amphotericin B. Xử lý mô mỡ và phân lập tế bào gốc tại labo nuôi cấy tế bào:
- Rửa mô mỡ 3 lần bằng PBS để loại bỏ các cấu trúc thuộc mạch máu, da... - Mô mỡ đƣợc phân tách bằng Collagenase, nồng độ collagenase trong tube mô mỡ là 0.15%.
- Đặt tube hỗn dịch trên vào incubator khoảng 30 phút, cứ sau 10 phút lại lắc một lần, sau 30 phút thêm FBS để dừng tác dụng của enzym
- Ly tâm tốc độ 1500rpm trong 5 phút, hút bỏ dịch nổi và thu đƣợc tế bào lắng dƣới đáy tube.
- Đếm số lƣợng tế bào thu đƣợc trong buồng đếm Nauebaer để xác định nồng độ tế bào có trong hỗn dịch thu đƣợc.
- Cấy vào đĩa petri sao cho đạt 20.000 TB/cm2 bề mặt nuôi cấy.
- Mỗi đĩa d=100mm sau đó đƣợc bổ sung ít nhất đủ 8ml môi trƣờng DMEM/1% kháng sinh/10% FBS
- Đặt đĩa vào incubator ẩm, nhiệt độ 370C và CO2 5%
- Quan sát tế bào và tiến hành thu tế bào bằng quy trình sử dụng trypsin khi mật độ tế bào đạt 80 diện tích che phủ.
- Các tế bào thu đƣợc sau đó đƣợc đếm xác định số lƣợng. Sau đó, bảo quản lạnh sâu hoặc cấy trở lại đĩa nuôi với mật độ 5000 TB/cm2
cho tới thế hệ thứ 5 để cung cấp cho nghiên cứu tiếp theo.