D 7 Trypsin nguyên bào sợi ở khoang dƣới và
3.1. Đặc điểm phân lập và hình thái tế bào
Xử lý mô mỡ để phân lập tế bào gốc trung mơ
A B
C D
Hình 4. Tách mô mỡ bằng enzym collagenase. (A) Thu mô mỡ. (B) Rửa sạch
mô mỡ theo quy trình. (C) Cắt lọc mơ mỡ. (D) Mô mỡ sau khi tách bằng enzym collagenase phân thành 3 lớp đặc trưng sau khi ly tâm: (1) lớp mỡ, (2) dịch nổi,
1
2
Bảng 1. Số lượng tế bào thu được từ mô mỡ
Chỉ tiêu
Giá trị
Min-Max x± SD
Số lƣợng tế bào thu đƣợc/gam mô 2,4x106 - 2,7x106 2,46x106 ± 1,4 Tỷ lệ % tế bào sống 96,3 - 97,2 96,4 ± 1,7
Nhận xét:
Với các mẫu mô xử lý và phân lập thành công, số lƣợng tế bào thu đƣợc sau khi xử lý mẫu mơ trung bình là 2,4x106
± 1,4/gram mơ. Tỉ lệ tế bào sống trung bình là 96,4± 1,7%.
Tế bào cơ bản có hình dạng tƣơng tự nhƣ ngun bào sợi có hình sao với các nhánh bào tƣơng dài.
Các tế bào thuộc loại tế bào bám dính vào bề mặt ni cấy của đĩa nhựa, và chỉ tạo đơn lớp, khơng thấy có sự chồng lấn lên nhau kể cả khi đã đạt 100 độ che phủ.
Tế bào gốc mỡ bắt đầu dính xuống bề mặt ni cấy sau khoảng 4-6 giờ khi đĩa nuôi đƣợc đặt trong tủ ấm 370
C và 5% khí CO2.
Đầu tiên, hình dạng tế bào là hình trịn nhỏ hoặc hình khơng xác định đƣợc quan sát thấy cùng với một số tế bào máu đơn nhân.
Dần dần, các tế bào bẹt và giãn rộng ra xung quanh và có hình thoi dài hoặc ngắn và sau đó là hình nhiều góc cạnh ở thời điểm 48 giờ.
A
B
Hình 5. Đĩa tế bào sau 48h nuôi cấy. Mẫu số 2, 50X.
- (5.A )Một số tế bào bám vào bề mặt ni cấy, dịch nổi có nhiều mảnh vỡ của mô, tế bào và cả mỡ.
- (5.B)Sau khi thay môi trường nuôi cấy mới, quan sát rõ các tế bào bám vào bề
1
A
B
Hình 6. Tế bào sau 4 và 10 ngày nuôi cấy. Mẫu số 2, 50X.
- (6.A) Sau 4 ngàyTế bào mọc nhiều hơn, khơng cịn các mảnh vỡ tế bào. - (6.B)Tế bào phát triển mạnh, sau 10 ngày, độ che phủ đạt 80% trypsin để cấy chuyển.
A
B
Hình 7. Tế bào gốc mỡ trên kính hiển vi đảo ngược 50X(A) và 100X(B). (A)(B). Đặc tính của tế bào gốc mơ mỡ. Tế bào bám dính, có hình dạng
ngun bào sợi, mọc đơn lớp. Hình thái tế bào ở ngày thứ 7. Tế bào phát triển có độ che phủ đạt khoảng 20%
A
B
Hình 8. Hình thái tế bào gốc mỡ sau khi nhuộm Giemsa. (100X)
Quan sát trên kính hiểm vi đảo ngược 100X ở hình 8 (A)(B) ta thấy tế bào
có hình sao, bào tương trải rộng với nhiều nhánh, có nhánh dài. Nhân tế bào hình trịn và hình trứng, ranh giới bờ nhân rõ rệt, nhân bắt màu kiềm đậm.
Khi nhuộm giemsa, tế bào bắt màu hồng nhạt, nhân hình trứng và bắt màu kiềm đậm thể hiện tế bào có khả năng phân chia mạnh. Tế bào từ các mẫu mơ đều có hình dạng tƣơng tự, khơng có nhân quái nhân chia.