của nguyên bào sợi
Với tất cả các thí nghiệm, nguyên bào sợi da đƣợc cấy trong đĩa 6 giếng ở mật độ 5×104
TB/giếng và duy trì trong mơi trƣờng tăng sinh tế bào gốc trung mô bao gồm Dulbecco's Modified Eagle‘s Medium (DMEM) đƣợc bổ sung 2mM L-glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin, 0.25 μg/ml amphotericin B (Invitrogen/GIBCO), 10% FBS (PAA).
Nguyên bào sợi đƣợc cấy trong 6 ngày (đạt 90 độ che phủ) trƣớc khi đồng ni cấy để phân tích di cƣ làm liền vết cạo.
Mơ hình thí nghiệm đồng ni cấy
Đồng nuôi cấy, nguyên bào sợi/tế bào sừng và tấm MSC
- Tạo vết cạo nguyên bào sợi
- Phân tích thời gian liền vết cạo - Đếm số lƣợng tế bào
Nguyên bào sợi/ tế bào sừng nuôi cấy trong giếng trong 6 ngày, mật độ cấy 50.000TB/giếng
MSC nuôi cấy trong insert trong 11 ngày, mật độ cấy 50TB/cm2
Môi trƣờng ni cấy MSC
Từ các thí nghiệm phân tích chúng tơi xây dựng đƣợc quy trình các bƣớc thí nghiệm đánh giá tác động của tấm tế bào gốc mô mỡ nhƣ sau:
Lô A Lô B Lô C
D1 Tạo tấm tế bào gốc mỡ bằng cách cấy 5000 TB/cm2 trên insert của transwell
DMEM/10%FBS/1%AB Thay môi trƣờng sau mỗi 2 ngày
Tạo tấm nguyên bào sợi bằng cách cấy 5000 TB/cm2 trên insert của transwell
DMEM/10%FBS/1%AB Thay môi trƣờng sau mỗi 2 ngày
D2 Cấy nguyên bào sợi vào khoang dƣới giếng transwel với số lƣợng 50.000TB/giếng trong
môi trƣờng
DMEM/1%FBS/1%AB
Cấy nguyên bào sợi vào khoang dƣới giếng transwel với số lƣợng 50.000TB/giếng trong môi trƣờng
DMEM/1%FBS/1%AB
Cấy nguyên bào sợi vào khoang dƣới giếng transwel với số lƣợng 50.000TB/giếng trong môi trƣờng DMEM/1%FBS/1%AB D5 Đồng ni cấy, đặt insert có TB gốc mỡ vào giếng
Đồng nuôi cấy, đặt insert có nguyên bào sợi vào giếng
Đồng nuôi cấy, đặt insert khơng có tế bào vào giếng