D 7 Trypsin nguyên bào sợi ở khoang dƣới và
4.3.1. Ảnh hưởng của tế bào gốc tới nguyên bào sợi da
Nguyên bào sợi là tế bào quan trọng nhất trong giai đoạn tăng sinh của quá trình liền vết thƣơng, chúng tạo ra các thành phần đệm gian bào và tổng hợp một số yếu tố tăng trƣởng. Nguyên bào sợi đáp ứng với tổn thƣơng là cốt yếu cho hàn gắn mọi vết thƣơng. Đáp ứng đầu tiên của nguyên bào sợi ở vùng da lành quanh tổn thƣơng bao gồm có sự tăng sinh và di cƣ tới tổn thƣơng. Khi ở vết thƣơng, nguyên bào sợi chịu trách nhiệm tạo sẹo do tính cố hữu của nó là co rút vết thƣơng, tiết đệm gian bào và tái lập mô. Trong trƣờng hợp quá trình liền vết thƣơng bất bình thƣờng, nguyên bào sợi đáp ứng lại với tổn thƣơng cũng không theo quy luật. Ví dụ nhƣ trƣờng bợp sẹo phì đại đƣợc đặc trƣng bởi sự tổng hợp quá mức đệm gian bào và tăng co rút vết thƣơng bởi sự tăng số lƣợng nguyên bào sợi cơ [18]. Các nguyên bào sợi đƣợc phân lập từ các vết loét tiểu đƣờng cũng cho thấy chúng khơng có khả năng sửa chữa tổn thƣơng do giảm khả năng tăng sinh [34], [48], giảm khả năng tổng hợp collagen [68] và giảm mức MMP - 2 và -3 (matrix metalloproteinase-2 and -3) [78]. Trong khi đó, nguyên bào sợi đƣợc phân lập từ vết loét tiểu đƣờng lại thấy giảm về tốc độ di cƣ và lại tăng mức hoạt động của MMP -9 [46].
Trong nghiên cứu gần đây, Smith và cộng sự đã chứng minh đƣợc sự tác động của việc nuôi cấy đồng thời tế bào gốc trung mô tủy xƣơng với nguyên bào sợi, trong đó mỗi loại tế bào đƣợc tách ra trong các buồng Boyden khác nhau có bổ sung huyết thanh bò và ngựa, nhận thấy đƣợc sự di trú và sinh sôi tăng lên của nguyên bào sợi [71]. Sự đáp ứng lại của nguyên bào sợi đã đƣợc xác định thông qua biểu hiện thay đổi của gen trong sự tƣơng tác giữa các tế bào. Điều này cho phép định hƣớng cho việc sử dụng tế bào gốc nhƣ một tác nhân điều trị các vết thƣơng về da.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo sát liệu nguyên bào sợi da đáp ứng với tổn thƣơng có thể đƣợc thay đổi hay khơng bởi tác động của tế bào gốc trung mô từ mơ mỡ [82]. Nghiên cứu cho thấy, các tín hiệu ngoại bào từ tế bào gốc có thể điều khiển nguyên bào sợi da tăng sinh, di cƣ. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi chỉ ra rằng: tế bào gốc mô mỡ cảm ứng nguyên bào sợi da tăng sinh, điều này tƣơng tự nhƣ một số cơng trình nghiên cứu đã cơng bố trƣớc đây với tế bào gốc trung mô từ tủy xƣơng. Các tác giả trong các cơng trình đó đã chứng minh: tế bào gốc trung mô tủy xƣơng kích thích phân bào và hóa ứng động thơng qua dịch nổi nuôi cấy của chúng đối với cả tế bào sừng và tế bào nội mô [22]. Tuy nhiên, chúng tơi cũng cịn thấy rằng sự tăng sinh nguyên bào sợi da trong thí nghiệm đƣợc tăng cƣờng bởi sự có mặt của tấm tế bào gốc, mật độ nguyên bào sợi da tăng cao nhất trong đồng nuôi cấy với tế bào gốc mơ mỡ. Khi có mặt tấm tế bào gốc mơ mỡ, nguyên bào sợi tăng sinh mạnh và rõ nét vào ngày thứ 2 và thứ 3 sau đồng ni cấy. Các thí nghiệm về khả năng di cƣ của nguyên bào sợi cũng cho thấy tấm tế bào gốc mô mỡ làm tăng khả năng di trú làm liền vết thƣơng in vitro.
Đối với nghiên cứu này, chúng tơi lựa chọn mơ hình nghiên cứu đồng ni cấy nguyên bào sợi và tấm tế bào gốc mô mỡ từ các cá thể khác nhau nhằm phân biệt rõ trách nhiệm của từng dạng tế bào riêng biệt. Nhờ hệ thống đồng ni cấy mà ta có thể xác định ảnh hƣởng của tế bào gốc mô mỡ đến các biểu hiện protein của nguyên bào sợi và nhận biết các tín hiệu ngoại lai điều khiển các đáp ứng của nguyên bào sợi. Các thí nghiệm trên chuột cho thấy: sự tƣơng tác ngoại lai giữa các loại tế bào khác nhau có thể bị tổn thƣơng do thiếu các thụ thể đặc hiệu, các phân tử tín hiệu…Tuy nhiên, có sự khác nhau giữa việc sửa chữa vết thƣơng trên chuột và trên cơ thể ngƣời. Lấy ví dụ, sự liền vết thƣơng ở chuột chủ yếu là do co kéo vết thƣơng nhƣng ngƣợc lại ở ngƣời thì sự biểu mơ hóa và tạo mơ hạt để đóng kín vết thƣơng lại là chủ yếu.
Trong các phân tích về protein của tế bào gốc mỡ, chúng tiết các collagen, fibronectin và yếu tố tăng trƣởng. Hàm lƣợng collagen type I và fibronectin đƣợc
xác định ít nhất là gấp 1000 lần cao hơn so với một số yếu tố tăng trƣởng. Nhƣ vậy, tế bào gốc mỡ đã có tham gia tổng hợp collagen ngay trong điều kiện nuôi cấy là môi trƣờng cho tế bào gốc mỡ. Chúng ta đều biết, collagen là thành phần rất quan trọng của mơ, nó tạo nên tính bền vững của mơ cũng nhƣ làm khung giá đỡ cho rất nhiều tế bào khác nhau của mô. Trong liền vết thƣơng, collagen làm cho vết thƣơng nhanh liền và hiện chúng đã có rất nhiều chế phẩm collagen từ tự nhiên dùng trong điều trị vết thƣơng. Trong nuôi cấy tế bào, khi bề mặt nuôi cấy đƣợc phủ một lớp mỏng collagen thì khả năng bám dính và tăng sinh của nguyên bào sợi hay tế bào sừng cũng tốt hơn.
Tổng hợp lại các nghiên cứu trên, rõ ràng tế bào gốc trung mô từ mơ mỡ đều kích thích ngun bào sợi da tăng sinh tới vết thƣơng. Sự kích thích tăng sinh và tăng di cƣ này đƣợc thể hiện khi có tấm tế bào gốc mơ mỡ. Song thực tế điều trị vết thƣơng thì vẫn cần tiếp tục khảo sát đánh giá tác dụng của tế bào gốc mơ mỡ đối với q trình liền vết thƣơng thơng qua các mơ hình vết thƣơng in vivo nhằm xác định liệu chúng có thực sự điều tiết sự tăng sinh và di cƣ của nguyên bào sợi đối với các tổn thƣơng da hay không. Vấn đề này đã đƣợc chứng minh với tế bào gốc trung mô từ tủy xƣơng, kết quả đánh giá in vivo cho thấy chúng làm tăng sức căng và bền của mô sau điều trị bằng tế bào gốc trung mô tủy xƣơng do tăng sản xuất collagen [53].